[发明专利]基于NKA-9型大孔树脂对驱虫斑鸠菊总黄酮粗提物的纯化生产方法

权利要求书

1.一种基于NKA-9型大孔树脂对驱虫斑鸠菊总黄酮粗提物的纯化生产方法，

本发明其特征在于：包括如下步骤：

步骤一：利用加热回流法对驱虫斑鸠菊药材进行总黄酮的提取；

步骤二：驱虫斑鸠菊总黄酮的纯化；

(1)对大孔吸附树脂进行预处理；

(2)大孔树脂的筛选：将步骤一中得到的驱虫斑鸠菊总黄酮粗提液加入等量预处理好的大孔吸附树脂中，取等量乙醇溶液解吸，于室温充分吸附、解吸12-24h，测定溶液吸光度。总黄酮含量采用NaNO₂溶液-Al(NO₃)₃溶液-NaOH溶液显色法测定；

(3)对筛选的大孔吸附树脂进行吸附动力学模型、吸附等温线模型回归方程拟合；

(4)均匀设计与统计分析：a.依次调节上样液浓度为0.5～8.5mg/mL；上样液pH为1～8；乙醇洗脱液浓度为10％～90％；洗脱流速为0.5～3mL/min进行单因素考察，并绘制筛选树脂的动态泄露曲线与洗脱曲线，用(2)中方法测定所得驱虫斑鸠菊提取液中总黄酮含量；b.根据a.中考察结果筛选出上样液浓度、上样液pH、洗脱液浓度三因素，以总黄酮回收率为优化指标，使用均匀设计表U₁₀(10³)进行驱虫斑鸠菊总黄酮纯化生产方法优化；

步骤三：纯化后驱虫斑鸠菊总黄酮体外抗氧化作用；

(1)清除1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基活性能力：称量驱虫斑鸠菊总黄酮提取物、纯化物和L-抗坏血酸(Vc)使其浓度呈梯度。取适量DPPH试剂，加入10～20倍量的乙醇溶液，混匀后避光保存。按比例1∶4取待测液和DPPH溶液混合，室温避光反应25～30min，测定其在517nm波长处的吸光度值，计算自由基清除率；

(2)清除2，2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基活性能力：将ABTS溶液与过硫酸钾溶液按比例混匀，于暗处反应14～16h得到ABTS工作液。按比例1∶9取(1)配制的梯度溶液与稀释40～50倍的ABTS工作液混合，室温避光反应8～12min，测定其在734nm波长处的吸光度值，计算自由基清除率。

2.根据权利要求1所述的一种基于NKA-9型大孔树脂对驱虫斑鸠菊总黄酮粗提物的纯化生产方法，其特征在于：所述的步骤二中的大孔吸附树脂为D101型、AB-8型、NKA型、NKA-9型、X-5型、DM130型、DM301型、LS-300型、LS-300B型号大孔树脂中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的一种基于NKA-9型大孔树脂对驱虫斑鸠菊总黄酮粗提物的纯化生产方法，其特征在于：所述的大孔吸附树脂为NKA-9型号的大孔吸附树脂。