[发明专利]一种环肽化合物及其分离鉴定方法和应用

权利要求书

1.一种环肽化合物，其特征在于，所述环肽化合物的分子式为C₄₅H₆₀N₈O₁₀，具有式I所示的结构：

式I。

2.分离鉴定权利要求1所述的一种环肽化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将干燥的地蚕根茎粉碎，并热水浸提，得到热水浸提液；使用超滤系统对热水浸提液超滤，得到分子量大于3万的截留液和分子量小于3万的透过液；

（2）取透过液通过D101大孔树脂，再分别使用50%乙醇和95%乙醇对吸附于大孔树脂的透过液进行洗脱，得到50%乙醇洗脱液、95%乙醇洗脱液；分别将50%乙醇洗脱液、95%乙醇洗脱液进行减压浓缩，得到得50%乙醇洗脱液浸膏、95%乙醇洗脱液浸膏；

（3）用适量甲醇溶解95%乙醇洗脱液浸膏，再使用凝胶柱色谱进行分离，洗脱溶剂为100%甲醇，得到100%甲醇洗脱液；经TLC检测合并100%甲醇洗脱液中的相同组分，得到9个组分Fr. A′~Fr. I′；

（4）取组分Fr.F′经反向C₁₈柱分离，洗脱溶剂为50%甲醇，得到50%甲醇洗脱液；经TLC检测合并50%甲醇洗脱液中的相同组分，共得到4个组分Fr. F′-1 ~ Fr. F′-4；

（5）取组分Fr.F′-2经高效液相色谱仪进行反相分析柱色谱分离纯化，洗脱溶剂为45%甲醇，得到地蚕环肽C，通过核磁波谱、质谱和改良Marfey法对地蚕环肽C的构型进行鉴定，鉴定结果表明所得地蚕环肽C为具有式I所示结构的环肽化合物。

3.根据权利要求2所述的一种环肽化合物的分离鉴定方法，其特征在于，所述步骤（1）中将干燥的地蚕根茎粉碎至300～500目。

4.根据权利要求2所述的一种环肽化合物的分离鉴定方法，其特征在于，所述步骤（1）中每公斤地蚕根茎所用热水5～15公斤，热水浸提工艺为：浸提次数为2～4次、浸提温度为60～90℃、每次浸提时间为1.8～2.2h。

5.根据权利要求4所述的一种环肽化合物的分离鉴定方法，其特征在于，所述步骤（1）中每公斤地蚕根茎所用热水8～15公斤，热水浸提工艺为：浸提次数为3～4次、浸提温度为70～90℃、每次浸提时间为2.0～2.2h。

6.根据权利要求2所述的一种环肽化合物的分离鉴定方法，其特征在于，所述步骤（3）中用适量甲醇溶解95%乙醇洗脱液浸膏，再使用凝胶柱色谱进行分离，洗脱溶剂为100%甲醇，每400mL接一瓶洗脱液，得到100%甲醇洗脱液；经TLC检测合并100%甲醇洗脱液中的相同组分，得到9个组分Fr. A′~Fr. I′。

7.根据权利要求2所述的一种环肽化合物的分离鉴定方法，其特征在于，所述步骤（4）中取组分Fr.F′经反向C₁₈柱分离，洗脱溶剂为50%甲醇，每200ml接一瓶洗脱液，得到50%甲醇洗脱液；经TLC检测合并50%甲醇洗脱液中的相同组分，共得到4个组分Fr. F′-1 ~ Fr. F′-4。

8.根据权利要求2所述的一种环肽化合物的分离鉴定方法，其特征在于，所述步骤（5）中通过改良Marfey法对地蚕环肽C的构型进行鉴定，鉴定步骤为：1）取地蚕环肽C于反应容器中，加入6M盐酸，密封，于105～115℃条件下油浴加热22～26h，得到水解产物；2）将水解产物重新溶解于水中，得到水解物溶液；在每μL水解物溶液中加入1%FDAA的丙酮溶液1.8～2.2μL、1M NaHCO₃溶液0.18～0.22μL，于45℃水浴加热0.8～1.2h，取出，静置至室温，再加入2M HCl溶液0.8～1.2μL终止反应，得到水解衍生化产物；3）使用Agilent 1260型HPLC仪器对水解衍生化产物和氨基酸标准品进行对比分析，验证地蚕环肽C的组成。