[发明专利]一种健脾益肾丸高效液相指纹图谱的构建方法及应用

说明书

本发明属于药物分析检测技术领域，具体涉及一种健脾益肾丸高效液相指纹图谱的构建方法及应用，所述健脾益肾丸高效液相指纹图谱构建方法对健脾益肾丸供试品溶液以及对照品溶液的高效液相指纹图谱进行比较，进而对健脾益肾丸的主要有效活性物质进行检测。所述对照品溶液包括甘草苷对照品溶液、丹酚酸B对照品溶液、丹酚酸A对照品溶液、芦荟大黄素对照品溶液、大黄酸对照品溶液、大黄素对照品溶液、大黄酚对照品溶液以及大黄素甲醚对照品溶液。本发明建立了健脾益肾丸的高效液相指纹图谱技术标准，通过指纹图谱中共有峰的有无特征，能够有效全面的监控健脾益肾丸的质量，具有稳定性佳、重复性好，可操作性强的特点。

技术领域

本发明属于药物分析检测技术领域，具体涉及一种健脾益肾丸高效液相指纹图谱的构建方法及应用。

技术背景

健脾益肾丸具有健脾益肾、活血化浊的功效，对于治疗脾肾阳气虚，兼有湿浊、水气和瘀毒，慢性肾功能衰竭见上述证候者具有很好的临床疗效。健脾益肾丸方由黄芪、白术、山药、酒苁蓉、豆蔻、丹参、大黄、炙甘草8味中药组成，方中重用黄芪益气健脾升阳运枢为君，酒苁蓉温肾扶阳、润肠通便为臣，丹参活血祛瘀为佐，炙甘草健脾而调和诸药，由于方中化学成分复杂多样，因此，该中药配方的质量控制对于其药效的发挥有重要影响。

目前，现有技术中主要采用单一指标成分或多指标成分含量的测定方法来控制健脾益肾丸配方法的产品质量，但均无法全面控制产品质量，例如专利文献CN105687994A公开了一种治疗慢性肾功能衰竭的中药组合物及其制备方法，该组合物为由黄芪10-50份、白术5-20份、山药10-50份、酒苁蓉5-20份、豆蔻5-20份、丹参5-30份、大黄5-20份和炙甘草3-20份，该专利采用丹酚酸B的HPLC测定作为该中药组合物制备方法的筛选指标；张丹采用高效液相色谱法测定肾衰健颗粒剂中大黄5种成分的含量，以甲醇-0.5％磷酸(85:15)为流动相进行等度洗脱，检测波长未为254nm，获得芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚5种大黄成分的含量，但该方法仅针对大黄一种中药成分进行分析，且该肾衰健颗粒剂的成分并未公开，难以获得复杂中药成份低于该检测方法是否产生影响，其适用性难以推测(张丹,郭喜红,马俊鹏,等.高效液相色谱法测定肾衰健颗粒剂中大黄成分的含量[J].中国医院药学杂志,2003,23(6):2)；另外，还有文献报道通过高效液相法对健脾益肾丸中黄芪的有效成份黄芪甲苷进行定量，作为健脾益肾丸的质量控制手段，但该方法仅只针对健脾益肾丸中的黄芪一种中药材成份进行测定，难以对健脾益肾丸的质量进行全面、准确的控制(廖伟明,张尚斌,曹秀君.健脾益肾丸的质量标准研究初探[J].河北中医药学报,2005,20(2):2)；也有采用HPLC-MS法同时测定健脾益肾丸中8个成分的含量(陈剑平,郑平,李中桂,等.HPLC-MS法同时测定健脾益肾丸中8个成分的含量[J].药物分析杂志,2017,37(6))，以乙腈-10mmol·L^-1乙酸铵溶液为流动相，梯度洗脱同时获得丹参素钠、丹酚酸B、松果菊苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊花糖苷、甘草苷、黄芪甲苷和芒柄花素的含量测定，该8中成分归属于黄芪、丹参、酒苁蓉和炙甘草4种中药成分，但对于健脾益肾丸的全面质量控制标准仍有一定距离。

近年来，指纹图谱技术已经成为中药复方质量控制与评价的重要手段，而目前现有的高效液相检测方法对健脾益肾丸进行质量控制的报道不足以解决这一问题，因此，评价健脾益肾丸质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的质量控制方法，建立健脾益肾丸的指纹图谱对其产品质量进行全面控制具有重要意义。

发明内容

针对上述现有技术中存在的问题，本发明提供了一种健脾益肾丸HPLC指纹图谱构建方法及应用，本发明构建的指纹图谱能够有效全面的监控健脾益肾丸的质量，具有稳定性佳、重复性好的特点。

第一方面，本发明提供了一种健脾益肾丸高效液相指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：

S1、供试品溶液配制