[发明专利]基于竞争性免疫分析的定量检测试剂盒及方法

说明书

本发明属于体外诊断与免疫检测技术领域，提出一种基于竞争性免疫分析的定量检测试剂盒，包括载体，所述载体上沿样本流动方向依次设置低浓度检测区和高浓度检测区，其中低浓度检测区包被有相对于靶分析物低亲和力的竞争抗原一，高浓度检测区包被有相对于竞争抗原一高亲和力的竞争抗原二，竞争抗原一和/或竞争抗原二与靶分析物竞争结合标记抗体。不同亲和力的竞争抗原发挥不同作用，在确保功能灵敏度的同时，拓宽了检测范围，实现对浓度范围跨度较大的具有单一抗原表位的化合物的准确定量，简化了检测步骤，提高了检测效率。

技术领域

本发明属于体外诊断与免疫检测技术领域，特别涉及一种基于竞争性免疫分析的定量检测试剂盒及方法。

背景技术

雌二醇（Estradiol，E2）是一种分子量为 272Da的类固醇激素，它是最具生物活性的雌激素。下丘脑-垂体-性腺轴负责调控 E2 的分泌，E2 在排卵的控制机制中起主导作用。E2 是非妊娠女性体内的一种重要且主要的生物活性雌激素，它主要由发育中的卵泡或黄体中产生，并且在促卵泡激素和黄体生成素的共同作用下，由卵泡细胞和颗粒细胞合成。睾丸和肾上腺皮质也可产生少量 E2，妊娠期妇女主要由胎盘产生 E2。循环中的 E2 主要与蛋白质相结合，只有 1-3% 的 E2 处于游离状态。血清中的雌二醇在男性和女性的各种临床疾病中均起着重要的诊断标志物的作用。定量检测血清雌二醇水平，在临床上用于阐明下丘脑-垂体-性腺轴，男性乳房发育症、产生雌激素的卵巢和睾丸肿瘤以及肾上腺皮质增生的生育障碍。此外，雌激素的检测还用于在体外受精中监测生育治疗和确定排卵时间。

在不同人群中，雌二醇水平跨度相当大，青春期前儿童，青少年，绝经前后妇女和孕妇中的雌二醇浓度范围超过几个数量级（40–2000 pg/mL）。此外，而对于进行体外受精的女性经卵巢刺激治疗后血清雌二醇水平可升高至10ng/mL左右。目前的免疫检测方法的在低雌二醇水平（＜40pg/mL）下缺乏适当的敏感度，而对于超出检测上限的高水平雌二醇的测定常需将标本稀释后再行测定，增加了检验人员的工作量和试剂成本以及出错误的风险。

目前临床上多采用免疫分析方法对雌二醇进行定量检测。雌二醇属于小分子半抗原类激素，只含单一抗原表位，需采用竞争性免疫分析模式进行检测。目前主流的用于检测只含单一抗原表位的分析物检测试剂主要分为两种竞争模式，分别是延时竞争法和非延时竞争法。采用延时竞争法可以提升检测的敏感度，但会导致检测时间增加，检测上限下降等，而非延时竞争法可以缩短检测时间，降低自动化难度，但会损失一定的敏感度。

发明内容

本发明针对现有的对具有单一抗原表位的化合物定量检测的不足，提供一种基于竞争性免疫分析的定量检测试剂盒及方法，利用该试剂盒检测时，具有优异的敏感度和较宽的检测范围，可满足临床上患者的鉴别诊断和治疗疗效监测两种需求。

为实现上述目的，本发明的技术方案是这样实现的，一种基于竞争性免疫分析的定量检测试剂盒，包括载体，所述载体上沿样本流动方向依次设置低浓度检测区和高浓度检测区，其中低浓度检测区包被有相对于靶分析物低亲和力的竞争抗原一，高浓度检测区包被有相对于竞争抗原一高亲和力的竞争抗原二，竞争抗原一和/或竞争抗原二与靶分析物竞争结合标记抗体。

在本发明第一个实施方案中，竞争抗原一为靶分析物结构类似物，竞争抗原二与靶分析物结构一致。

在本发明的一个实施方案中，所述标记抗体为被荧光微球标记的抗体。

在本发明的一个实施方案中，所述载体为微流控芯片，竞争抗原一和竞争抗体二沿样本流动方向依次包被在微通道内形成低浓度检测区和高浓度检测区。

在本发明的一个实施方案中，当载体为微流控芯片时，标记抗体设置在微通道内位于低浓度检测区的前端或设置在加样孔形成标记区。

在本发明的一个实施方案中，当载体为微流控芯片时，高浓度检测区与废液收集池之间还设置有质控位区。