[发明专利]一种ASCC3多肽构建及其抗肝癌活性应用

说明书

本发明公开了一种ASCC3多肽的构建及其抑制Wnt/β‑catenin通路及肝癌细胞增殖的活性；其中，一种ASCC3多肽的构建的序列，其包括，其编码蛋白序列SEQID NO:1，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2；一种ASCC3多肽的构建方法，其包括，人工合成并ASCC3多肽编码序列与pCMV‑Flag真核表达载体在T4连接酶作用下连接，获得重组质粒；将所述重组质粒转染肝癌细胞。本发明利用多种功能手段分析其对肝癌中Wnt/β‑catenin通路及癌细胞增殖的拮抗作用。在细胞生物学层面证明了此ASCC3多肽具有拮抗Wnt/β‑catenin通路并抑制肝癌细胞增殖的潜能。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，涉及ASCC3多肽的构建及其抗原发性肝癌的活性，具体是明确一种拮抗ASCC3多肽及其应用于原发性肝癌的靶向治疗。

背景技术

原发性肝癌(简称肝癌)是世界范围内高发的恶性肿瘤，在所有肿瘤中发病率居第6位，其相关死亡率则高居第3位。由于病毒性肝炎的流行和黄曲霉素污染等原因，肝癌在我国尤为高发，发病率和死亡率在所有肿瘤中分居第5和2位，严重影响我国国民的健康。肝癌的临床治疗目前主要依赖于传统的手术治疗结合放疗和化疗，患者一旦在治疗后发生复发，由于缺乏更多的治疗措施，通常预后显著不良。因此，开发新的肝癌治疗手段，对改善肝癌患者的愈后及生存质量具有重要的意义。肝癌的进程和转移存在复杂的分子调控机制，其中Wnt/β-catenin作为重要的促癌信号通路，在肝癌的发生发展中发挥举足轻重的地位，目前大量研究表明Wnt/β-catenin通路的过度活化与肝癌的生长、干细胞性、转移和耐药均存在密切联系。因此，靶向Wnt/β-catenin通路对肝癌的靶向治疗具有举足轻重的价值。

Wnt/β-catenin通路对肝癌的促进作用与β-catenin介导的转录和基因表达存在密切联系。β-catenin在结合下游癌基因启动子区域后，需要募集多种表观遗传相关蛋白以打开上述基因区域的结构，促使RNA聚合酶等蛋白结合和信使RNA(mRNA)的转录。因此，靶向β-catenin关键转录调控蛋白可以作为一种替代靶向措施抑制β-catenin介导的转录。我们近期通过研究发现ASCC3是一个重要的β-catenin促肝癌发生转录活化基因。ASCC3具有DNA解旋酶活性，可以收β-catenin募集后结合DNA并诱导DNA的解旋和松散，促进基因的转录。基于此，我们发明了一种干扰ASCC3与β-catenin结合的多肽，并发现此多肽可以抑制ASCC3与β-catenin靶基因启动子区域的结果，从而拮抗β-catenin靶基因的转录，抑制肝癌的进程。该ASCC3多肽具有特异性抑制肿瘤中β-catenin转录活性的功能，具有良好的肿瘤特异性和靶向性，在肝癌的临床靶向治疗中具有广阔的应用开发前景。

发明内容

作为本发明其中一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供一种ASCC3多肽的构建的序列，其编码蛋白序列SEQID NO:1，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2；一种ASCC3多肽的构建方法，其包括，人工合成并ASCC3多肽编码序列与pCMV-Flag真核表达载体在T4连接酶作用下连接，获得重组质粒；将所述重组质粒转染肝癌细胞。本发明利用多种功能手段分析其对肝癌中Wnt/β-catenin通路及癌细胞增殖的拮抗作用。在细胞生物学层面证明了此ASCC3多肽具有拮抗Wnt/β-catenin通路并抑制肝癌细胞增殖的潜能。

具体为：一种ASCC3多肽的构建序列，其cDNA序列和表达的多肽氨基酸序列：

编码cDNA序列：