[发明专利]一种肿瘤抗原抗体复合物及制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种肿瘤抗原抗体复合物及制备方法和应用，该肿瘤抗原抗体复合物包括肿瘤抗原和抗体，肿瘤抗原抗体复合物通过将肿瘤抗原与抗体结合得到，其为抗体偶联蛋白3G9‑NY‑ESO‑1。本发明中，利用断裂内含肽GP41‑1反式剪接方法实现肿瘤抗原与抗体的连接，二者之间利用肽键连接，其稳定性更高，特异性结合更强，反应条件温和，效率高，工艺简单，且未加入有毒有害物质，也不会产生副产物等，安全性高，克服了现有技术中利用化学偶联方法等实现抗原抗体连接时需要加入化学试剂、有一定毒性、化学偶联不稳定、偶联键易断裂等问题，肿瘤抗原抗体复合物能作为一种新型的肿瘤疫苗使用，为新型肿瘤疫苗的研发提供技术支撑。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种肿瘤抗原抗体复合物及制备方法和应用。

背景技术

肿瘤抗原主要包括肿瘤特异性抗原和肿瘤相关抗原。机体产生肿瘤抗原的可能机制有：基因突变；细胞原本不表达的基因被激活；胚胎时期抗原或分化抗原的异常、异位表达；外源性基因(如病毒基因)表达等。纽约食管鳞状上皮癌抗原1(NY-ESO-1)是肿瘤-睾丸抗原(CTA)亚家族之一，NY-ESO-1在细胞内经加工产生抗原肽，与白细胞抗原(HLA)分子结合形成复合物，经CD4+T淋巴细胞及细胞毒性T淋巴细胞(CTL)识别，可诱导机体产生针对相应肿瘤细胞的较强的特异性免疫应答(国际检验医学杂志.36(21),3138-3141,2015)。

内含肽是其宿主蛋白质自切除并催化侧翼序列通过肽键连接的内部蛋白质元件。断裂内含肽在蛋白质内含子中间特定位点发生断裂形成N端片段和C端片段，分别由两个相距较远的两个基因编码，两个片段通过非共价键相互识别，重建催化活性中心，介导蛋白质反式剪接(中国生物化学与分子生物学报.24(6),512-521,2008)。断裂内含肽GP41-1是文献报导中剪接最稳定和最快速的(J Biol Chem.287,28686-28696,2012)。Wang Han等利用断裂内含肽GP41-1成功将一个低温酵母株的DNA结合域(DBD)与合成VP64激活域偶联，构建成基于GAL4的双向表达系统(Pnas.115(15),3900-3905,2018)。Yao Zhong等利用断裂内含肽GP41-1开发了断裂内含肽介导的蛋白质连接(SINPL)的活细胞方法，可应用于哺乳动物细胞系(Nature Communications.11:2440,2020)。

3G9是由专利CN 101888856 B中提供的抗人树突状细胞(DC细胞)上的DEC205的抗体。DEC205作为DC细胞表面的模式识别受体，能够特异性的捕获抗原分子，加工递呈给机体免疫系统，诱导免疫反应。抗DEC205单克隆抗体可以作为靶向性载体将药物特异性的传输至DC细胞，并能够有效的增强这一过程。体外实验表明，经过DEC205靶向抗体辅助的抗原递呈效率能够增强1000倍(张顶.DEC-205靶向抗体的制备及其人源化改造[D].北京协和医学院(清华大学医学部)中国医学科学院,2013)。

随着免疫治疗领域的发展，NY-ESO-1过继性T细胞疗法、联合检查点抑制剂治疗等方法的局限性突显，DEC205单克隆抗体作为载体在肿瘤免疫治疗中有巨大的应用前景。

发明内容

为解决现有技术中存在的技术问题，本发明的目的在于提供一种肿瘤抗原抗体复合物及制备方法和应用。

为实现上述目的，达到上述技术效果，本发明采用的技术方案为：

一种肿瘤抗原抗体复合物，所述肿瘤抗原抗体复合物包括肿瘤抗原和抗体，所述肿瘤抗原抗体复合物的重链氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，轻链氨基酸序列如SEQ IDNO:6所示，轻链不参与反应。

进一步的，所述肿瘤抗原抗体复合物通过将肿瘤抗原与抗体结合得到，所述肿瘤抗原抗体复合物为抗体偶联蛋白3G9-NY-ESO-1，所述肿瘤抗原为NY-ESO-1，所述抗体为DEC205的单克隆抗体3G9。

进一步的，所述肿瘤抗原抗体复合物通过断裂内含肽GP41-1反式剪接将肿瘤抗原与抗体结合得到。