[发明专利]一种肿瘤抗原抗体复合物及制备方法和应用

权利要求书

1.一种肿瘤抗原抗体复合物，其特征在于，所述肿瘤抗原抗体复合物包括肿瘤抗原和抗体，所述肿瘤抗原抗体复合物的重链氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示，轻链氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，轻链不参与反应。

2.根据权利要求1所述的一种肿瘤抗原抗体复合物，其特征在于，所述肿瘤抗原抗体复合物通过将肿瘤抗原与抗体结合得到，所述肿瘤抗原抗体复合物为抗体偶联蛋白3G9-NY-ESO-1，所述肿瘤抗原为NY-ESO-1，所述抗体为DEC205的单克隆抗体3G9。

3.根据权利要求2所述的一种肿瘤抗原抗体复合物，其特征在于，所述肿瘤抗原抗体复合物通过断裂内含肽GP41-1反式剪接将肿瘤抗原与抗体结合得到。

4.根据权利要求1-3任一所述的一种肿瘤抗原抗体复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤(1)：抗体融合蛋白3G9-IntN重链表达载体构建

步骤(2)：抗体融合蛋白3G9-IntN制备

步骤(3)：融合蛋白GB1-IntC-NY-ESO-1表达载体构建

步骤(4)：融合蛋白GB1-IntC-NY-ESO-1制备

步骤(5)：抗体偶联蛋白3G9-NY-ESO-1制备。

5.根据权利要求4所述的一种肿瘤抗原抗体复合物的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，抗体融合蛋白3G9-IntN重链表达载体构建的步骤包括：以质粒pUC57-Kan-GP41IN为模板，设计碱基序列如SEQ ID NO:3所示的Fc-IntN-F和碱基序列如SEQ ID NO:4所示的Fc-IntN-R，通过PCR扩增Fc-IntN基因片段，然后凝胶回收相应片段，克隆至phIgG1-3G9载体上的多克隆位点BamH I与HindⅢ之间，构建成可表达抗体融合蛋白3G9-IntN的重链表达载体phIgG1-3G9-IntN。

6.根据权利要求4所述的一种肿瘤抗原抗体复合物的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，抗体融合蛋白3G9-IntN制备的步骤包括：将步骤(1)构建的抗体融合蛋白3G9-IntN重链表达载体和抗体3G9轻链表达载体phIgK-3G9以1:1的质量比共同转染293T细胞，表达抗体融合蛋白3G9-IntN，蛋白重链氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示，轻链氨基酸序列如SEQ IDNO:6所示。

7.根据权利要求4所述的一种肿瘤抗原抗体复合物的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，融合蛋白GB1-IntC-NY-ESO-1表达载体构建的步骤包括：

通过使用BamH I和NdeI双酶切质粒pUC57-Kan-GB1-GP41IC和pET-30a(+)-NY-ESO-1，分别得到GB1-IntC片段和线性化载体pET-30a(+)-NY-ESO-1，然后使用T4连接酶，用T4连接方法构建成融合蛋白GB1-IntC-NY-ESO-1表达载体pET-30a(+)-GB1-IntC-NY-ESO-1。

8.根据权利要求4所述的一种肿瘤抗原抗体复合物的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，融合蛋白GB1-IntC-NY-ESO-1制备的步骤包括：

将步骤(3)构建的融合蛋白GB1-IntC-NY-ESO-1表达载体pET-30a(+)-GB1-IntC-NY-ESO-1转化至BL21(DE3)感受态细胞中，，根据《pET系统手册》制备融合蛋白GB1-IntC-NY-ESO-1，蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示，使用HisTrapTM HP纯化目的蛋白。