[发明专利]一种用于鉴定少精症的标志物、筛选方法及其应用

权利要求书

1.一种用于鉴定少精症的标志物，其特征在于，包括PE(O-16:0/22:6)、TAG(54:8)_FA22:6、HexCer(18:1/18:1)、TAG(50:2)_FA16:0、TAG(52:7)_FA22:6、FFA(22:6)、TAG(56:8)_FA22:6、TAG(54:7)_FA22:6、TAG(56:8)_FA16:0、SM(18:1)、FFA(24:1)和DAG(16:0/18:0)。

2.一种如权利要求1所述的用于鉴定少精症的标志物的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：取少精症患者的精液作为待测样本，将所述待测样本离心后获得精浆样本；采用超高效液相色谱-串联质谱法检测所述精浆样本，得到原始数据；根据相对标准偏差和变异系数对所述原始数据内偏离的单个峰进行过滤，只保留单组空值不多于50％或所有组空值不多于50％的峰面积数据，对所述原始数据中的缺失值按照最小值二分之一的数值模拟方法进行填补，得到整理数据；

使用SIMCA软件对所述整理数据进行对数转换加UV格式化处理，得到处理数据，将所述处理数据用主成分分析和正交偏最小二乘法-判别分析后得到差异代谢物数据；

使用多元变量统计分析方法对所述差异代谢物数据进行分析，得到分析数据，所述多元变量统计分析方法中的卡值标准为学生t检验的P值小于0.05且OPLS-DA模型第一主成分的变量投影重要度大于1；

将所述分析数据以火山图和差异代谢物层次聚类热图形式进行可视化展示并利用KEGG数据库和/或MetaboAnalyst数据库进行信号通路分析；再利用Graph pad 9.0软件对差异基因进行ROC分析并对有显著性差异的代谢物进行绘图和分析，即完成筛选。

3.根据权利要求2所述的用于鉴定少精症的标志物的筛选方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-串联质谱法中的流动相A包括四氢呋喃、甲醇、水和甲酸铵，所述四氢呋喃、甲醇和水的体积比为(28-32):(18-22):(45-55)；

所述超高效液相色谱-串联质谱法中的流动相B包括四氢呋喃、甲醇、水和甲酸铵，所述四氢呋喃、甲醇和水的体积比为(70-80)：(18-22)：(3-7)；，所述甲酸铵的浓度均为8-12mmol/L。

4.根据权利要求2所述的用于鉴定少精症的标志物的筛选方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-串联质谱法的进样量为1.8-2.2μL、柱温为52-58℃。

5.根据权利要求2-4任一项所述的用于鉴定少精症的标志物的筛选方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-串联质谱法的流动相梯度为0min:100％流动相A，0％流动相B；1min:80％流动相A，20％流动相B；3.0min:60％流动相A，40％流动相B；3.5min:45％流动相A，55％流动相B；7.5min:25％流动相A，75％流动相B；9.0min:0％流动相A，100％流动相B；11min:0％流动相A，100％流动相B；11.5min:100％流动相A，0％流动相B；13.0min:0％流动相A，100％流动相B；

或者，所述流动相梯度为0min:100％流动相A、0％流动相B；1.0min:80％流动相A、20％流动相B；3.0min:60％流动相A、40％流动相B；3.5min:45％流动相A、55％流动相B；7.5min:25％流动相A、75％流动相B；9.0min:0％流动相A、100％流动相B；11.0min:0％流动相A、100％流动相B；11.5min:98％流动相A、2％流动相B。

6.一种如权利要求1所述的用于鉴定少精症的标志物在制备用于预防或治疗少精症的药物中的应用。

7.一种用于预防或治疗少精症的药物，其特征在于，包括如权利要求1所述的用于鉴定少精症的标志物。

8.一种如权利要求1所述的用于鉴定少精症的标志物在制备用于诊断少精症的试剂盒中的应用。

9.一种用于诊断少精症的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的用于鉴定少精症的标志物。