[发明专利]一种可放大信号的细胞免疫荧光染色方法在审
| 申请号： | 202210692451.0 | 申请日： | 2022-06-17 |
| 公开（公告）号： | CN115127893A | 公开（公告）日： | 2022-09-30 |
| 发明（设计）人： | 刘子瑜;姜文宁;韩璐璐;贾凌云 | 申请（专利权）人： | 大连理工大学 |
| 主分类号： | G01N1/30 | 分类号： | G01N1/30;G01N33/533;G01N33/58 |
| 代理公司： | 大连东方专利代理有限责任公司 21212 | 代理人： | 周媛媛;李馨 |
| 地址： | 116024 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 放大 信号 细胞 免疫 荧光 染色 方法 | ||
1.一种适配体-HCR引物复合物，其特征在于：核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种细胞免疫荧光染色试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的适配体-HCR引物复合物、发夹探针H1和发夹探针H2。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述发夹探针H1为3’端修饰了荧光基团的SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述发夹探针H2为5’端修饰了荧光基团的SEQ ID NO.3所示核苷酸序列。
5.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于：所述荧光基团包括Alexa Fluor488。
6.一种可放大信号的细胞免疫荧光染色方法，其特征在于：将适配体-HCR引物复合物锚定于细胞表面，添加发夹探针H1和发夹探针H2，进行原位HCR反应，延伸出带荧光的HCR产物链，实现细胞免疫荧光染色。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)将适配体-HCR引物复合物溶液在85-95℃下加热90-95s，随后室温冷却10-20min，将冷却后适配体-HCR引物复合物溶液稀释于杂交缓冲液中，终浓度为0.25-0.5uM；
(2)向细胞中加入步骤(1)所得适配体-HCR引物复合物溶液室温孵育1-2h，使用2x SSC沖洗至少三遍；
(3)将发夹探针H1、发夹探针H2溶液在85-95℃下加热90-95s，随后室温冷却10-20min，将冷却后H1、H2溶液稀释于杂交缓冲液中，终浓度为0.25-0.5uM；
(4)向细胞中加入步骤(3)所得H1溶液和H2溶液室温孵育3-12h，使用2×SSC冲洗至少三遍，即完成细胞免疫荧光染色。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述细胞包括癌细胞。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述癌细胞包括三阴性乳腺癌细胞、非小细胞肺癌细胞。
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