[发明专利]一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的引物组合物、试剂盒及应用

说明书

本发明属于阪崎克罗诺杆检测技术领域，具体涉及一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的引物组合物、试剂盒及应用。本申请公开的一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的引物组合物，包括RPA引物组以及PCR的引物组，具体为正向引物RPA‑F、反向引物RPA‑R、探针、PCR‑F、PCR‑R；本发明所述的试剂盒，运用于对婴儿配方奶粉质量安全的检测，能够快速确定婴儿配方奶粉中是否含有阪崎克罗诺杆菌。

技术领域

本发明属于阪崎克罗诺杆检测技术领域，具体涉及一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的引物组合物、试剂盒及应用。

背景技术

婴儿配方奶粉(PIF)是作为除母乳之外，婴幼儿这一特殊人群的主要膳食营养来源，其产品的卫生安全与婴幼儿的健康息息相关，对社会的稳定和发展有着密不可分的关系。由于婴儿缺乏发达的免疫系统或竞争性肠道菌群，因此婴儿食品的微生物学安全性非常重要。

而阪崎克罗诺杆菌(C.sakazakii)是PIF中最为常见和频发的致病菌，可导致罕见的危及新生儿生命的脑膜炎、败血症和坏死性小肠结肠炎。在婴儿配方奶粉食品安全的检测中，世界各国将C.sakazakii列为必须检测的微生物指标之一。

当前传统的C.sakazakii检测方法步骤繁琐、耗时费力，需要经过从培养富集到血清型鉴定等一系列冗长的步骤，整个过程需要耗时4-7天。而使用最为广泛的PCR技术虽然具备高效、特异、灵敏的优点，但由于其对复杂的热循环设备的要求和进行扩增所必需的精确温度控制导致PCR被局限在实验室的使用范围内，从而限制了它在资源匮乏的环境中的应用。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的PCR技术被局限在实验室的使用范围内，从而限制了它在资源匮乏的环境中的应用的技术问题，提供一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的引物组合物、试剂盒及应用。

本发明的引物组合物构建的试剂盒，运用于对婴儿配方奶粉质量安全的检测，能够快速确定婴儿配方奶粉中是否含有阪崎克罗诺杆菌。

为了实现本发明的上述目的，本发明采用以下技术方案，

一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的引物组合物，包括：

RPA引物组以及PCR的引物组；其中

RPA引物组：

正向引物RPA-F：TGGAAGCGGGATGACGTGACCGGCCAGTATTT

反向引物RPA-R：TTATCAAGCCACCAGCGCATCATGTCGTAG

探针：

CATGCACCTGTTCAGCAGCCGTCAGCCCGA(FAM-dT)(THF)(BHQ1-d

CAACTGGGAAAATCA-SpacerC3。

进一步的，所述PCR的引物组，

PCR-F:GCCGAACCCCGAAAAACT

PCR-R:TGCCAGGCGGTGAAAATG

更进一步的，所述所述PCR的引物组，目的片段大小为288bp。

进一步的，所述RPA引物组，目的片段大小为128bp。

同样的，本发明也提供了一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的试剂盒，包括上述的引物组合物；

一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的试剂盒的应用，用于检测婴儿配方奶粉是否含有阪崎克罗诺杆菌，具体应用过程，包括以下步骤：

S1.引物与探针的设计

根据C.sakazakii的gluA基因设计所需的RPA引物组和PCR的引物组；