[发明专利]一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的引物组合物、试剂盒及应用

权利要求书

1.一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的引物组合物，其特征在于，包括：

RPA引物组以及PCR的引物组；

RPA引物组：

正向引物RPA-F：TGGAAGCGGGATGACGTGACCGGCCAGTATTT

反向引物RPA-R：TTATCAAGCCACCAGCGCATCATGTCGTAG

探针：

CATGCACCTGTTCAGCAGCCGTCAGCCCGA(FAM-dT)(THF)(BHQ1-d

CAACTGGGAAAATCA-SpacerC3。

2.根据权利要求1所述的一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的引物组合物，其特征在于，所述PCR的引物组：

PCR-F:GCCGAACCCCGAAAAACT

PCR-R:TGCCAGGCGGTGAAAATG。

3.根据权利要求2所述的一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的引物组合物，其特征在于，所述PCR的引物组，目的片段大小为288bp。

4.根据权利要求1所述的一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的引物组合物，其特征在于，所述RPA引物组，目的片段大小为128bp。

5.一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-4任一项所述的引物组合物。

6.一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的试剂盒的应用，其特征在于，将权利要求5的试剂盒用于检测婴儿配方奶粉是否含有阪崎克罗诺杆菌。

7.一种恒温快速检测阪崎克罗诺杆菌的试剂盒的应用，其特征在于，所述试剂盒的应用过程，包括以下步骤：

S1.引物与探针的设计

根据C.sakazakii的gluA基因设计所需的RPA引物组和PCR的引物组；

S2.建立实时荧光RPA反应体系和qPCR反应体系

使用TwistAmp exo试剂盒以50μL的体积进行实时RPA反应；其他成分包括每个420nM引物、120nM探针、14mM乙酸镁、2μLDNA模板、无核酸酶水以及荧光基础缓冲液。