[发明专利]一种抗凝全血法鉴定鸡隐性白羽基因型的分子检测方法及其应用

说明书

本发明公开了一种抗凝全血法鉴定鸡隐性白羽基因型的分子检测方法及其应用，属于分子生物技术。根据隐性白羽基因突变特征序列设计三条特异性引物：NOR‑UP：ACCCCATCCCTGAAGACACT；MUT‑UP：TTGCGTCATTCCTTCCTTATCTA；DOWN：GCCCAGAGAGCACAGCAGTAAT。利用该引物组合进行PCR扩增反应，通过观察反应产物凝胶电泳条带就能鉴定鸡隐形白羽基因型。该方法无需进行基因组DNA的提取，操作简单，易于推广，降低了鸡隐性白羽基因型分子检测的成本，有利于提高家鸡品种选育工作效率。

技术领域

本发明涉及分子生物技术领域，特别是涉及一种抗凝全血法鉴定鸡隐性白羽基因型的分子检测方法及其应用。

背景技术

羽色与冠型、体型性状等均是家禽是一种重要的外观表型性状，作为品种的特征性状之一而被农业工作者们广泛关注。羽色的表型多种多样，如白羽、黄羽、芦花羽、横斑羽、麻羽等。其中白羽性状可根据白羽基因的显隐性分为显性白羽和隐性白羽，前者主要有显型白羽基因II控制、后者主要由隐性白羽基因cc、oo、PP和aa这4对隐性基因控制。

隐性白化基因aa定位在家鸡(Gallus gallus domesticus)的1号常染色体的络氨酸酶基因(Tyrosinase，TYR)上。TYR基因第4内含子中插入一段长约7.5kb的内源性逆转录病毒，导致TYR基因转录物中缺少第五外显子编码的跨膜结构域而无法正常转录，从而使TYR失去正常功能活性，致使黑色素无法合成，导致隐性白羽形成。

目前对家鸡的隐性白羽基因型在群体中进行鉴定的方法主要有两种，第一种即通过传统测交判断，第二种则是通过分子检测技术。在隐性白羽鸡的选育中，分子手段相比传统育种而言准确性高，周期短，工作步骤繁琐，但同时也存在着需要一些专业技术人员和一定量的专业设备的协助才可完成。因此，对隐性白羽基因型检测的简单化和成本低廉化成为了生产实践中的迫切需求。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗凝全血法鉴定鸡隐性白羽基因型的分子检测方法及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，利用本发明公开的引物对抗凝全血模板进行PCR扩增，经琼脂糖凝胶电泳分型后就能够鉴定鸡隐性白羽基因型，该方法操作简单，易于推广，并且对隐性白羽鸡的育种选育提供理论基础和数据支持。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种抗凝全血法鉴定鸡隐性白羽基因型的引物组合，包括：

NOR-UP：ACCCCATCCCTGAAGACACT；

MUT-UP：TTGCGTCATTCCTTCCTTATCTA；

DOWN：GCCCAGAGAGCACAGCAGTAAT。

本发明还提供一种抗凝全血法鉴定鸡隐性白羽基因型的试剂盒，包含所述的引物组合。

本发明还提供一种抗凝全血法鉴定鸡隐性白羽基因型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

以鸡全血为模板，利用所述的引物组合或所述的试剂盒进行PCR扩增反应，对扩增产物凝胶电泳后进行辨别，若电泳结果只出现一条542bp的条带，则为非隐性白羽基因纯合子，若电泳结果只出现一条310bp条带，则为隐性白羽基因纯合子，若电泳结果出现一条542bp条带和一条310bp条带，则为携带隐性白羽基因的杂合子。

进一步地，所述模板为鸡抗凝全血。

进一步地，所述鸡抗凝全血以双蒸水稀释后，形成鸡抗凝全血双蒸水稀释液，作为模板。

进一步地，所述鸡抗凝全血与双蒸水的体积比为1：2。