[发明专利]一种抗凝全血法鉴定鸡隐性白羽基因型的分子检测方法及其应用

权利要求书

1.一种抗凝全血法鉴定鸡隐性白羽基因型的引物组合，其特征在于，包括：

NOR-UP：ACCCCATCCCTGAAGACACT；

MUT-UP：TTGCGTCATTCCTTCCTTATCTA；

DOWN：GCCCAGAGAGCACAGCAGTAAT。

2.一种抗凝全血法鉴定鸡隐性白羽基因型的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的引物组合。

3.一种抗凝全血法鉴定鸡隐性白羽基因型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

以鸡全血为模板，利用权利要求1所述的引物组合或权利要求2所述的试剂盒进行PCR扩增反应，对扩增产物凝胶电泳后进行辨别，若电泳结果只出现一条542bp的条带，则为非隐性白羽基因纯合子，若电泳结果只出现一条310bp条带，则为隐性白羽基因纯合子，若电泳结果出现一条542bp条带和一条310bp条带，则为携带隐性白羽基因的杂合子。

4.根据权利要求3所述的方法，所述模板为鸡抗凝全血。

5.根据权利要求4所述的方法，所述鸡抗凝全血以双蒸水稀释后，形成鸡抗凝全血双蒸水稀释液，作为模板。

6.根据权利要求5所述的方法，所述鸡抗凝全血与双蒸水的体积比为1：2。

7.根据权利要求3-6任一项所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应条件为：将配制好的扩增反应体系放置于PCR仪中，95℃预变性5min；95℃变性15s，61℃退火15s，72℃延伸30s，35个循环，72℃最终延伸5min，4℃保存。

8.根据权利要求3-6任一项所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为：2×血液样本缓冲液5μL、鸡抗凝全血双蒸水稀释液1μL、NOR-UP和MUT-UP引物各0.2μL、DOWN引物0.4μL、10mM脱氧核苷三磷酸0.2μL、血液超保真DNA聚合酶0.3μL和双蒸水2.7μL。

9.一种权利要求1所述的引物组合或权利要求2所述的试剂盒在鉴定鸡隐性白羽基因型中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述引物组合或所述试剂盒中引物NOR-UP和DOWN用于非隐性白羽等位基因的检测，引物MUT-UP和DOWN用于隐性白羽等位基因的检测。