[发明专利]抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗缪勒氏管激素抗体‑酶标记物的制备方法，包括以下步骤：碱性磷酸酶的马来酰胺化、AMH抗体的巯基化、交联、封闭、纯化，该制备方法优化改良了常规的采用异型双功能交联剂制备酶标抗体步骤，所述方法中采用超滤的方式纯化马来酰胺化的碱性磷酸酶、巯基化的AMH抗体及标记后的AMH抗体‑碱性磷酸酶标记物，取代常规的透析方式的纯化，不仅省去了透析的繁杂过程，缩短了酶标抗体的制备时间，还可以减少原料损耗；还公开了利用该制备方法制得的抗缪勒氏管激素抗体‑酶标记物及利用所述抗缪勒氏管激素抗体‑酶标记物制备AMH酶标抗体检测试剂的应用，其制得的AMH酶标抗体检测试剂检测AMH灵敏度高，稳定性好。

技术领域

本发明涉及医疗诊断技术领域，特别是涉及一种抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物及其制备方法和应用。

背景技术

抗缪勒管激素(Anti-mullerian hormone，AMH)是一种属于转化生长因子β(TGFβ)家族的二聚体糖蛋白。AMH最早的商业化试剂盒是由Anshlabs公司研发的酶免试剂盒，并且该试剂盒是应用Anshlab公司AMH专利抗体研发的N端-配C端鼠单克隆抗体酶免试剂盒。对于已经注册的酶联免疫法、量子点荧光、荧光层析法，酶联免疫法需要手动操作，或者半手动操作，步骤繁琐，耗时耗力，并且容易人为因素导致交叉污染；胶体金侧向免疫层析法操作简单快捷，但是由于方法本身的限制，其灵敏度低，且容易导致批间，批内差异较大。

现有技术中存在化学发光类信号强度指示剂标记AMH抗体时引起抗体灵敏度下降、发光强度不理想、标记复合物不稳定等问题。抗体和所有蛋白一样，是由氨基酸残基组成的。蛋白的氨基基团(包括赖氨酸侧链和氨基端)通常被用于共价链接标记物。尽管在文献中报道了多种多样的标记方法，但实际上只有4种最常用的标记方法，且不同之处仅在于标记物被转换为反应性衍生物的方式。无论何种方法，几乎毫无例外的都是将标记物共价连接到抗体分子的赖氨酸残基上。四种常用标记方法包括高碘酸钠、琥珀酰酯(NHS)、碳二亚胺、同型或异型双功能试剂，当标记物为蛋白分子(如碱性磷酸酶ALP)时，由于抗体和标记分子具有多个胺，因此抗体标记流程略为复杂。

在酶促化学发光免疫分析检测中，抗原或抗体酶标记物对免疫分析的灵敏度及特异性具有重要的作用，是酶促化学发光免疫分析检测中的关键试剂。碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)，是一种酶促化学发光免疫诊断试剂应用广泛的酶，通过某些技术手段将其与抗体结合，是酶促化学发光免疫诊断试剂开发中非常重要的一步。一般情况下，碱性磷酸酶与抗体交联的方法主要有如下几种：戊二醛法、高碘酸钠法、异双官能团法。

碱性磷酸酶作为一种标记酶，广泛应用于临床免疫的定量诊断中。碱性磷酸酶的标记物溶液是体外诊断试剂盒的组分之一，碱性磷酸酶的酶活稳定性成为试剂盒质量性能的重要影响因素。同其他生物酶一样，碱性磷酸酶半衰期短、易失活。酸、碱、盐离子、温度条件的变化都会改变甚至使酶完全失去活性。碱性磷酸酶在溶液中的长期稳定保存技术是体外诊断试剂盒产品的关键技术。提高酶稳定性技术包括化学修饰技术和添加剂技术。然而现有技术存在以下缺陷：

采用异型双功能交联剂制备酶标抗体步骤常使用透析的方法纯化中间品及产物，过程繁杂，用时长，且原料损耗较大；

2)现有酶标抗体稀释液制备方法不能满足不同方法制备的酶标抗体稳定性需求，市场上鲜有通用的碱性磷酸酶酶标记物稳定剂，缺乏具有针对性的稳定稀释液制备方法。

因此亟需提供一种新型的抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物的制备方法及其应用来解决上述问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种抗缪勒氏管激素抗体酶标记物及其制备方法和应用，优化改良了常规的采用异型双功能交联剂制备酶标抗体步骤，缩短了酶标抗体的制备时间，制得的AMH酶标抗体检测试剂检测AMH灵敏度高，稳定性好。

为解决上述技术问题，本发明采用的第一个技术方案是：提供一种抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物的制备方法，包括以下步骤：