[发明专利]抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)碱性磷酸酶的马来酰胺化

配制GMBS工作液，将ALP溶液与GMBS工作液混合，室温避光反应30min～60min后，采用超滤离心管离心纯化2～3次；

(2)AMH抗体的巯基化

配制DTT工作液，将AMH抗体溶液与DTT工作液混合，室温避光反应30min～60min后，采用超滤离心管离心纯化3～5次；

(3)交联、封闭

将马来酰胺化的碱性磷酸酶与巯基化的AMH抗体混合，室温避光反应1～2h；反应结束后，按一定浓度先后加入N-乙基马来酰亚胺和L-半胱氨酸，放置于室温，避光反应30min～60min，进行封闭；

(4)纯化

将步骤(3)制备的交联产物采用超滤离心管离心纯化3～5次，将纯化后的产物用pH为7.0～7.5的10mM PBS稀释到合适的储存体积，再加入等体积甘油，-20℃冷冻保存。

2.根据权利要求1所述的抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物的制备方法，其特征在于，步骤(1)的具体步骤包括：

(11)配置0.9mg/ml GMBS工作液，避光

将0.0060g GMBS加入600ul DMSO，混匀，取100ul加入1ml pH为7.45的PBS中混匀；

(12)将配制好的0.9mg/ml GMBS工作液加入5mg/ml ALP中，室温避光反应30～60min，GMBS：ALP的摩尔比为10:1-50:1；

(13)将反应液用超10kD超滤离心管，10000r/min，10min/次，浓缩纯化2～3次；倒置超滤管内管2000r/min，离心1min，收集纯化液，获得马来酰胺化的碱性磷酸酶。

3.根据权利要求1所述的抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物的制备方法，其特征在于，步骤(2)的具体步骤包括：

(21)配置10mM DTT工作液，避光

将0.0154g DTT溶于1ml 10mM pH为7.1的PBS中，混匀，取100ul加入900ul PBS 7.1中，得10mM DTT；

(22)将10mM DTT工作液加入2mg/ml AMH抗体中，室温避光反应30-60min，DTT：AMH抗体的摩尔比为100：1～600:1；

(23)将反应液用50kD超滤离心管，8000r/min，5min/次，浓缩纯化3～5次；倒置超滤管内管2000r/min，离心1min，收集纯化液，获得巯基化的AMH抗体。

4.根据权利要求1所述的抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中，加入N-乙基马来酰亚胺的浓度为按照每毫克蛋白加入1mgN-乙基马来酰亚胺；加入L-半胱氨酸的浓度为按照每毫克蛋白加入1mg L-半胱氨酸。

5.根据权利要求1所述的抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物的制备方法，其特征在于，步骤(4)的具体步骤包括：

将步骤(3)制备的交联产物用50kD超滤离心管，8000r/min，5min/次，浓缩纯化3～5次；倒置超滤管内管2000r/min，离心1min，收集纯化液；将纯化后的产物用pH为7.0～7.5的10mM PBS稀释到合适的储存体积，再加入等体积甘油，-20℃冷冻保存。

6.一种由如权利要求1至5任一项所述方法制备的抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物。

7.一种利用如权利要求6所述抗缪勒氏管激素抗体-酶标记物制备AMH酶标抗体检测试剂的应用。