[发明专利]一种采用植物提取物体外诱导扩增NK细胞的方法在审
| 申请号： | 202210681141.9 | 申请日： | 2022-06-16 |
| 公开（公告）号： | CN114874984A | 公开（公告）日： | 2022-08-09 |
| 发明（设计）人： | 俞英豪;彭昉;王冶陶;洪茜茜;叶志春;蔡燕萍;王朝芳 | 申请（专利权）人： | 杭州中赢生物医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 杭州航璞专利代理有限公司 33498 | 代理人： | 崇鑫 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 采用 植物 提取物 体外 诱导 扩增 nk 细胞 方法 | ||
1.一种采用植物提取物体外诱导扩增NK细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、向Cellgro基础培养基中加入0.6-1.4μg/mL OK-432、450-550IU/mL IL-2、15-25ng/mL IL-15、45-55ng/mL IL-21和0.1-1μg/mL复合中药提取物得到诱导培养基；
向Cellgro基础培养基中加入900-1100U/mL rhGM-CSF、450-550U/mL rhIL-4、0.1-1μg/mL复合中药提取物得到增殖培养基；
S2、无菌采集外周血，向外周血中加入DPBS进行稀释，然后向其中加入相对密度为1.077的Ficoll分离液，离心，洗涤得到外周血单个核细胞；
S3、将所得外周血单个核细胞稀释至浓度为1-5×105/mL，然后加入诱导培养基中重悬，加入4.5-5.5μg/mL anti-CD137，培养2-3h；
然后加入增殖培养基培养至第4天，补加460-540IU/mL IL-2、15-25ng/mL IL-15和45-55ng/mL IL-21；
培养到第7天，扩瓶培养；
培养至第14天获得扩增的NK细胞。
2.根据权利要求1所述采用植物提取物体外诱导扩增NK细胞的方法，其特征在于，S1中，复合中药提取物为忍冬藤和丹参的提取物。
3.根据权利要求2所述采用植物提取物体外诱导扩增NK细胞的方法，其特征在于，S1中，忍冬藤与丹参的质量比为10：1-2。
4.根据权利要求1所述采用植物提取物体外诱导扩增NK细胞的方法，其特征在于，S1中，IL-15和复合中药提取物的浓度比为18-22：300-700。
5.根据权利要求1所述采用植物提取物体外诱导扩增NK细胞的方法，其特征在于，S1中，rhGM-CSF和rhIL-4的浓度比为950-1050：480-520。
6.根据权利要求1所述采用植物提取物体外诱导扩增NK细胞的方法，其特征在于，S2中，外周血与DPBS的质量比为1：1.8-2.2。
7.根据权利要求1所述采用植物提取物体外诱导扩增NK细胞的方法，其特征在于，S2中，Ficoll分离液与DPBS的质量比为1：6-10。
8.根据权利要求1所述采用植物提取物体外诱导扩增NK细胞的方法，其特征在于，S3中，anti-CD137浓度为4.7-5.3μg/mL。
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