[发明专利]痰液标本无细胞上清游离DNA二代测序建库、检测方法

权利要求书

1.一种痰液标本cfDNA二代测序建库方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取、质控：对痰液标本进行化痰处理，离心，从上清液中提取痰液标本的cfDNA，对所述cfDNA进行浓度检测；

2)构建文库：使用基因二代测序检测试剂盒进行痰液标本的cfDNA文库的构建，得二代测序的痰液标本的cfDNA的基因测序文库。

2.如权利要求1所述痰液标本cfDNA二代测序建库方法，其特征在于，所述步骤1)中化痰处理的方法为：粘稠型痰液标本加入1：2-3体积生理盐水，依次加入2ml 0.5mol/L DTT，观察化痰效果，直至化痰完全；水样痰液加入1：1生理盐水后，依次加入2ml 0.5mol/L DTT，观察化痰效果，直至化痰完全。

3.如权利要求2所述痰液标本cfDNA二代测序建库方法，其特征在于，每次加入DTT溶液后，震荡5min，再观察化痰效果。

4.如权利要求2所述痰液标本cfDNA二代测序建库方法，其特征在于，所述步骤1)的痰液标本至少为3ml。

5.如权利要求2所述痰液标本cfDNA二代测序建库方法，其特征在于，所述离心条件为转速1500g，时间5min。

6.如权利要求2所述痰液标本cfDNA二代测序建库方法，其特征在于，所述步骤1)中的痰液标本在进行化痰处理前置于固定液中保存或者运送，所述固定液为50％乙醇和聚乙二醇400的混合液，所述50％乙醇和聚乙二醇400的体积比为49:1。

7.一种痰液标本cfDNA提取方法，其特征在于，所述痰液标本cfDNA用于构建二代测序的cfDNA的基因测序文库，包括如下步骤：

1)对收集到的痰液标本进行化痰处理，得到化痰完全的痰液标本；

2)将化痰完全的痰液标本，离心，转速1500g，时间5min；

3)取离心后上清液，提取痰液标本的cfDNA。

8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，所述化痰处理的方法为：粘稠型痰液标本加入1：2-3体积生理盐水，依次加入2ml 0.5mol/L DTT，观察化痰效果，直至化痰完全；水样痰液加入1：1生理盐水后，依次加入2ml 0.5mol/L DTT，观察化痰效果，直至化痰完全；在进行化痰处理前，痰液标本置于固定液中保存，所述固定液为50％乙醇和聚乙二醇400的混合液，所述50％乙醇和聚乙二醇400的体积比为49:1。

9.一种痰液标本cfDNA二代测序检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含有用权利要求1-6任一项所述建库方法制备的DNA测序文库。

10.根据权利要求9所述的痰液标本cfDNA二代测序检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒使用时的痰液标本cfDNA的起始投入量为150ng。