[发明专利]一种高效诱导柑橘单胚性品种产生四倍体的方法

权利要求书

1.一种高效诱导柑橘单胚性品种产生四倍体的方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)将种子从柑橘单胚性品种成熟果实取出，去除果胶后，剥去外种皮；培养箱中催芽，种子胚根萌发后移栽至营养钵培养；

(2)柑橘实生幼苗生长到高度5-7cm，用刀片在幼苗第一片真叶以下将其切断，保留上胚轴长度2-3cm，切口保持湿润，避光条件下促进愈伤组织形成；

(3)切口愈伤组织形成后，用秋水仙素溶液浸泡处理，用保鲜膜包裹营养钵顶部保持切口湿润，置于光照条件下促进愈伤组织生芽；

所述的秋水仙素水溶液含秋水仙素0.0125％-0.1％、二甲亚砜1-2％；秋水仙素水溶液浸泡愈伤组织的时间为1-2h；

(4)愈伤组织再生出芽后待其萌发长出2-4片真叶时，筛选单胚性四倍体。

2.根据权利要求1所述的高效诱导柑橘单胚性品种产生四倍体的方法，其特征在于：步骤(2)中，切口保持湿润通过将吸头倒扣于切口上实现。

3.根据权利要求1所述的高效诱导柑橘单胚性品种产生四倍体的方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)柑橘单胚性品种果实成熟后采果剥取种子，用NaOH溶液浸泡去除果胶；清水洗净后，剥去外种皮并将其置于铺有湿滤纸的培养皿，置于培养箱催芽；待种子胚根萌发后，将其播种于营养钵并置于生长室培养，用保鲜膜包裹营养钵顶部保湿；

(2)当实生幼苗长至高度5-7cm；用刀片在幼苗地上部2-3cm处将其切断，并用吸头倒扣于切口进行保湿；用黑布包裹营养钵顶部避光，促进愈伤组织形成；

(3)切口愈伤组织形成后，用秋水仙素水溶液浸泡愈伤组织，用保鲜膜包裹营养钵顶部保湿，并置于光照条件下促进愈伤组织生芽；

(4)切口处再生出芽后，待芽萌发长出2-4片真叶时，筛选单胚性四倍体。

4.根据权利要求3所述的高效诱导柑橘单胚性品种产生四倍体的方法，其特征在于：步骤(1)中，去除果胶的条件为：用1mol/L NaOH溶液浸泡10min；培养箱催芽的温度为28℃；生长室培养的条件为：温度25±1℃；光照16h，黑暗8h。

5.根据权利要求3所述的高效诱导柑橘单胚性品种产生四倍体的方法，其特征在于：步骤(3)中，用秋水仙素水溶液浸泡愈伤组织通过将装满秋水仙素水溶液的吸头倒扣于切口愈伤组织实现。

6.根据权利要求1或3所述的高效诱导柑橘单胚性品种产生四倍体的方法，其特征在于：筛选单胚性四倍体的方法为：根据多倍体叶片形态特征初筛，并用流式细胞仪对疑似多倍体再生芽进行倍性鉴定，再用柑橘特异单多胚分子标记对明确倍性的四倍体进行单多胚标记鉴定。