[发明专利]一种7β-羟基甾体脱氢酶突变体有效
| 申请号： | 202210670590.3 | 申请日： | 2022-06-14 |
| 公开（公告）号： | CN114854707B | 公开（公告）日： | 2023-09-12 |
| 发明（设计）人： | 欧阳鹏飞;钱小龙;戴忆思;张雄寅;张傲南 | 申请（专利权）人： | 苏州百福安酶技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12N15/53;C12N1/21;C12P33/06;C12P33/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海申浩律师事务所 31280 | 代理人： | 贾师英 |
| 地址： | 215513 江苏省苏州市常熟市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 羟基 脱氢酶 突变体 | ||
1.一种7β-羟基甾体脱氢酶突变体，其选自下组：氨基酸序列为SEQ ID No.3的多肽，氨基酸序列为SEQ ID No.4的多肽，氨基酸序列为SEQ ID No.5的多肽。
2.编码如权利要求1所述7β-羟基甾体脱氢酶突变体的基因。
3.一种表达如权利要求1所述7β-羟基甾体脱氢酶突变体的微生物。
4.如权利要求3所述的微生物，其特征在于，为大肠杆菌。
5.如权利要求1所述的7β-羟基甾体脱氢酶突变体或者如权利要求3所述的微生物在催化合成熊去氧胆酸中的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，以7-羰基石胆酸为底物，用所述7β-羟基甾体脱氢酶突变体或者所述微生物静息细胞催化不对称还原反应，得到熊去氧胆酸。
7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，以鹅去氧胆酸为底物，用7β-羟基甾体脱氢酶突变体或者其表达微生物静息细胞催化与7α-羟基甾体脱氢酶进行串联催化鹅去氧胆酸的差向异构化反应，得到熊去氧胆酸。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：
(1)使用7α-羟基甾体脱氢酶催化鹅去氧胆酸立体选择性氧化生成7-羰基石胆酸；
(2)加入所述7β-羟基甾体脱氢酶突变体或者所述微生物静息细胞催化上述步骤(1)所得7-羰基石胆酸的不对称还原，制得熊去氧胆酸。
9.如权利要求7或8所述的应用，其特征在于，反应体系中加入辅酶再生系统。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述辅酶再生系统选自下组：
(1)以葡萄糖为辅酶再生底物、以葡萄糖脱氢酶为辅酶再生酶，包含NADPH或NADP+的葡萄糖脱氢酶再生系统；
(2)以丙酮酸为辅酶再生底物、以乳酸脱氢酶为辅酶再生酶，包含NADH或NAD+的乳酸脱氢酶再生系统。
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