[发明专利]基于氟代吡啶型化合物的蛋白质-蛋白质偶联方法

权利要求书

1.一种基于氟代吡啶型化合物的蛋白质-蛋白质偶联方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)称取氟代吡啶型化合物5-氟-4-苯砜基-吡啶甲醛(FPPA)加入到DMF中配制FPPA溶液；其中FPPA结构式如下：

(2)向含半胱氨酸蛋白质1溶液中加入2倍量还原剂三(2-羧乙基)膦(TCEP)，调节pH为7.5，静置；

(3)向步骤(2)的溶液中缓慢加入相对于蛋白质1的2-4倍量步骤(1)中配制的FPPA溶液，并保证滴加过程及溶液最终pH为7.5，FPPA能够通过氟的离去对蛋白质1进行修饰；

(4)反应完全后，透析反应液，除去多余FPPA和新生成小分子，并将透析后反应液浓缩，得到纯净的蛋白质1-FPPA复合物溶液；

(5)向蛋白质1-FPPA复合物溶液中加入2倍量TECP，1.2倍量含半胱氨酸蛋白质2，调pH为7.5，通过苯砜基的离去即能够完成蛋白质-蛋白质偶联，将反应液过分子排阻色谱得到纯净的蛋白质1-蛋白质2偶联产物a；

或者，向蛋白质1-FPPA复合物溶液中加入2倍量TCEP，1倍量含N端半胱氨酸蛋白质3，调pH为6.5，通过醛基和半胱氨酸的环化反应即能够完成蛋白质-蛋白质偶联，将反应液过分子排阻色谱得到纯净的蛋白质1-蛋白质3偶联产物b。

2.根据权利要求1所述基于氟代吡啶型化合物的蛋白质-蛋白质偶联方法，其特征在于，还包括：

(6)向蛋白质1-蛋白质2偶联产物a中加入2倍量含有1,2-氨基硫醇类化合物或者含N端半胱氨酸蛋白质，调溶液pH为6.5，即能够完成三组分多功能生物大分子的构建；

或者，向蛋白质1-蛋白质3偶联产物b中加入2倍量含巯基化合物或者含半胱氨酸蛋白质，调溶液pH为7.5，即可完成三组分多功能生物大分子的构建。

3.根据权利要求1所述基于氟代吡啶型化合物的蛋白质-蛋白质偶联方法，其特征在于：所述FPPA的合成方法为2-甲基-5-氟吡啶通过mCPBA氧化得到氮氧化物2，经过硝化得到化合物3；经溴代在4号位引入溴原子，得到化合物4；化合物4去氮氧化，得到化合物5；化合物5再和苯亚磺酸钠反应，得到化合物6；最后，以二氧化锰对化合物6进行氧化，得到最终产物FPPA：

合成路线如下：

4.根据权利要求1所述基于氟代吡啶型化合物的蛋白质-蛋白质偶联方法，其特征在于：步骤(3)中对蛋白质1的修饰产率可达100％。

5.根据权利要求1所述基于氟代吡啶型化合物的蛋白质-蛋白质偶联方法，其特征在于：步骤(5)中蛋白质1-蛋白质2偶联产物a的产率可达80％；醛基不参与反应，反应活性仍被保留；步骤(5)中蛋白质1-蛋白质3偶联产物b的产率可达50％；苯砜基不参与反应，反应活性仍被保留。

6.根据权利要求1至5任一项所述基于氟代吡啶型化合物的蛋白质-蛋白质偶联方法，其特征在于：所有的反应都是在水溶液中室温下进行；蛋白质来源于基因重组，不需要任何额外的化学修饰。