[发明专利]一种定量测定细胞角蛋白19片段的试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种定量测定细胞角蛋白19片段试剂盒的制备方法，具体制备方法为：（1）将质量比为（0.04~0.1）:1的细胞角蛋白19片段单克隆抗体和磁珠进行包被处理，得包被细胞角蛋白19片段单克隆抗体的磁珠，之后用磁珠稀释液对其稀释，得到试剂R1;（2）将吖啶酯标记抗体复合物用抗体稀释液进行稀释，得到试剂R2；（3）将细胞角蛋白19片段用抗原稀释液配制成校准品；（4）将细胞角蛋白19片段用抗原稀释液配制成质控品。本发明制备的试剂盒克服了现有试剂盒存在的CYFRA 21‑1抗原“S”型反应曲线，解决低端灵敏度差、高端线性差的问题，具有灵敏度高，线性范围较宽，特异性较好，准确度较高，精密度良好，性价比较高，相对于进口试剂盒成本低的优点，非常适于推广使用。

技术领域

本发明涉及免疫分析医学技术领域，具体涉及一种定量测定细胞角蛋白19片段的试剂盒及其制备方法。

背景技术

细胞角蛋白19片段(CYFRA 21-1)对各种类型肺癌的诊断、病情检测、疗效评价具有一定的临床应用价值，尤其是对监测非小细胞型肺癌(NSCLC)的病程有重要的诊断价值。CYFRA 21-1对肺癌总的灵敏度为65.7％，其中，对NSCLC(非小细胞型肺癌)和SCLC(小细胞型肺癌)的灵敏度分别是80％和40％，对肺腺癌和肺鳞癌的灵敏度分别是78.9％和83.3％。当病人血清中CYFRA 21-1的浓度高于30ng/mL且影像学检测显示肺部存在不清晰的环形阴影时，则诊断为原发性支气管肺癌的可能性较高。

目前，市面上检测细胞角蛋白19片段的试剂盒主要以电化学发光法和化学发光微粒子免疫检测法为主。这两种方法的灵敏度、准确度、特异性都很高，但是罗氏、雅培等进口厂家的试剂在市场上仍然占有很大份额。为了替代昂贵的进口试剂，减轻医疗负担，越来越多的国产试剂开始研制并涌入市场。

申请号为CN200710121167.3公开了一种细胞角蛋白19片段化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法，该试剂盒包括：细胞角蛋白19片段CYFRA 21-1校准品；细胞角蛋白19片段CYFRA 21-1单克隆抗体包被的固相载体；酶标记的细胞角蛋白19片段CYFRA 21-1单克隆抗体；以及上述酶所作用的化学发光底物。该专利虽然是在酶联免疫分析的基础上应用酶催化发光底物，通过检测发光底物产生的光信号代替酶联免疫分析中的显色底物，但该体系的原理是酶促发光，而不是直接化学发光，常存在不稳定的缺陷。

申请号为CN202110072767.5公开了一种磁微粒化学发光法测定细胞角蛋白19片段含量的试剂盒，该试剂盒包括细胞角蛋白19片段抗体标记的磁微粒试剂、细胞角蛋白19片段抗体标记的碱性磷酸酶试剂；细胞角蛋白19片段抗体标记的磁微粒试剂中，细胞角蛋白19片段抗体标记的磁微粒的浓度为0.05-1mg/ml；所述细胞角蛋白19片段抗体标记的碱性磷酸酶试剂中，细胞角蛋白19片段抗体标记的碱性磷酸酶浓度为0.05-2μg/ml。该专利公开的试剂盒原理和上面CN200710121167.3相同，均是酶促化学发光。

上面公开的两种试剂盒均是根据酶促发光原理来检测细胞角蛋白19的含量。目前以化学发光微粒子免疫检测法研制的国产试剂盒主要由吖啶酯类化合物标记的抗体试剂、包被在磁性微球上的抗体试剂、校准品、质控品等组成。但是大部分试剂盒在实际检测过程中会出现CYFRA 21-1抗原反应线性常呈“S”型，导致低端灵敏度差，高端线性差，线性范围较窄的问题。同时一些研究实践证明，细胞角蛋白19片段在血清基质中是不稳定的。当含有细胞角蛋白19片段的校准品或质控品以液体状态长时间储存时，细胞角蛋白19片段会被破坏和变性。本发明针对以上技术难点，研制出线性范围宽、灵敏度高的，可以和进口试剂相媲美的CYFRA 21-1检测试剂盒。同时研制出一种与该试剂盒配套的高稳定性的以液体形式存在的CYFRA 21-1校准品和质控品。

发明内容

本发明的目的在于提供一种定量检测细胞角蛋白19片段的试剂盒及其制备方法，以解决现有化学发光微粒子免疫检测法试剂盒在实际检测过程中会出现CYFRA 21-1抗原反应线性常呈“S”型，导致低端灵敏度差，高端线性差，线性范围较窄的问题。