[发明专利]一种定量测定细胞角蛋白19片段的试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种定量测定细胞角蛋白19片段试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将质量比为（0.04~0.1）:1的细胞角蛋白19片段单克隆抗体和磁珠进行包被处理，得包被细胞角蛋白19片段单克隆抗体的磁珠，之后用磁珠稀释液对其稀释，得到试剂R1；

（2）将吖啶酯标记抗体复合物用抗体稀释液进行稀释，得到试剂R2；

（3）将细胞角蛋白19片段用抗原稀释液配制成校准品；

（4）将细胞角蛋白19片段用抗原稀释液配制成质控品;

所述磁珠稀释液组分为100mM PBS，50mM KCl，0.5%BSA，0.5%酪蛋白，0.05% 吐温20，0.05%Proclin300，0.09%叠氮化钠，所述磁珠稀释液的pH为7.0~7.4;

所述步骤（2）中试剂R2的制备方法具体如下：

将细胞角蛋白19片段单克隆抗体与吖啶酯混悬处理，除去未交联上的吖啶酯，保留吖啶酯标记抗体复合物；将吖啶酯标记抗体复合物用抗体稀释液稀释到一定浓度得试剂R2；所述抗体稀释液组分为50mM MES，150mM NaCl，0.5% 酪蛋白，0.1% Thesit，0.1%Proclin300；所述抗体稀释液的pH为6.0~6.5；所述试剂R2中吖啶酯标记抗体复合物浓度为0.2ug/mL；

所述抗原稀释液组分为20mM PBS，5mM EDTA，1%蔗糖，5%甘露醇，20%乙二醇，5% BSA，0.05% 吐温20，0.05% Proclin300，0.05% Proclin950，所述抗原稀释液的pH为7.0~7.5。

2.根据权利要求1所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）试剂R1的具体制备方法如下：

（a）重悬：用交联缓冲液清洗磁珠后去除上清液，再用交联缓冲液重悬磁珠；

（b）活化：向重悬磁珠中加入活化剂得活化磁珠；

（c）交联：向活化磁珠中加入细胞角蛋白19片段单克隆抗体进行混悬反应，反应完成后去除上清液得抗体-磁珠交联物；

（d）封闭：将抗体-磁珠交联物用封闭剂封闭，封闭完成后得包被抗体的磁珠，用磁珠稀释液重悬包被抗体的磁珠至一定浓度得试剂R1；

所述细胞角蛋白19片段单克隆抗体与磁珠的质量比为0.06：1。

3. 根据权利要求2所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤（a）中重悬所用交联缓冲液为20~100mM MES, pH为5.0~6.0，所述磁珠为羧基磁珠，所述羧基磁珠的粒径为1.5~3μm。

4. 根据权利要求3所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述交联缓冲液为100mMMES, pH为5.5。

5.根据权利要求3所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述羧基磁珠的粒径为3μm。

6.根据权利要求2所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤（b）中活化条件为25℃下混悬活化30分钟。

7.根据权利要求2所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述活化剂为EDC，所述EDC的终浓度为0.5~5mg/ml。

8.根据权利要求7所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述EDC的终浓度为2mg/ml。

9.根据权利要求2所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤（c）中混悬反应条件为20~37℃下混悬反应2-24h。

10.根据权利要求9所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，所述混悬反应条件为25℃下混悬反应6h。