[发明专利]一种LAMP-Taqman检测鸡毒支原体的引物和探针及其应用

权利要求书

1.一种LAMP-Taqman检测鸡毒支原体的引物和探针，其特征在于，包括：

内引物FIP：5′-CCGCCATTCATACCACCACTAAAGCCTGAACCAAAACCA-3′；

内引物BIP：5′-GGAATGGATAATGCTGCTCCACACCAACTTTTTCAGTTTGACCAT-3′；

外引物F3：5′-CTGAACCAAAGCCAAATCC-3′；

外引物B3：5′-GTCTTTGATTTTTGCATAGTCAT-3′；

环引物LF：5′-GGAGGGTTTGGCATCGGATC-3′；

环引物探针LBP：5′-AGCAGCTGCTAAAACAGCTTTGA-3′。

2.如权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，所述环引物探针LBP的5′端标记有荧光基团，3′端标记有淬灭基团。

3.如权利要求2所述的引物和探针，其特征在于，所述环引物探针LBP为：5′-FAM-AGCAGCTGCTAAAACAGCTTTGA-3′BHQ。

4.权利要求1-3任一项所述的引物和探针在非诊断性检测鸡毒支原体中的应用。

5.一种用于检测鸡毒支原体的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1-3任一项所述的引物和探针。

6.如权利要求5所述的用于检测鸡毒支原体的试剂盒，其特征在于，还包括基础缓冲液、氯化钾溶液、硫酸铵溶液、吐温20、DNA聚合酶、甜菜碱、硫酸镁溶液、dTNPs和去离子水。

7.利用权利要求5所述的试剂盒检测鸡毒支原体的方法，其特征在于，具体操作为：提取鸡毒支原体的核酸为模板，用所述试剂盒进行LAMP扩增，并在扩增过程中进行实时荧光检测。

8.如权利要求7所述的检测鸡毒支原体的方法，其特征在于：所述LAMP扩增的体系包括以下试剂及用量：pH8.8Tris-HCl 20mmol，KCl 10mmol，(NH₄₎₂SO₄ 10mmol，吐温20 0.024μL，Bst DNA polymerase large fragment 8U，Taq DNA polymerase 5U，甜菜碱1mol，MgSO₄8mmol，dNTPs 1.6mmol，内引物FIP 2.0μmol，内引物BIP 2.0μmol，外引物F3 0.5μmol，外引物B3 0.5μmol，环引物LF 0.5μmol，环引物探针LBP 0.5μmol，去离子水补足至24μL。

9.如权利要求7所述的检测鸡毒支原体的方法，其特征在于：所述LAMP扩增的反应温度为62℃-64℃，反应时间为45-50min。

10.如权利要求9所述的检测鸡毒支原体的方法，其特征在于：所述LAMP扩增的反应温度为63℃，反应时间为45min。