[发明专利]一种酶法快速检测2’-岩藻糖基乳糖的方法

说明书

本发明提供了一种酶法快速检测2’‑岩藻糖基乳糖的方法，属于食品检测技术领域。本发明将不同浓度的2’‑岩藻糖基乳糖标准品与α1,2‑岩藻糖苷酶在磷酸缓冲液中反应后，加入L‑岩藻糖脱氢酶和NADP+，在340 nm下测量溶液的吸光度，得到2’‑岩藻糖基乳糖浓度和吸光度的标准曲线；按照上述方法测量待测样品吸光度，根据标准曲线，得出样品中2’‑岩藻糖基乳糖的含量。本申请的检测方法使得所有2’‑岩藻糖基乳糖能够同步进行转化，提高检测的准确性和灵敏度。

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，尤其涉及一种酶法快速检测2’-岩藻糖基乳糖的方法。

背景技术

母乳低聚糖是母乳中仅次于乳糖和脂质的物质，在母乳中的含量约为15%。现有的研究表明，母乳低聚糖对新生儿有许多重要的影响：①母乳低聚糖可以防止病原体附着在婴儿粘膜表面，降低病毒、细菌和原生动物寄生虫感染的风险；②母乳低聚糖可以降低婴儿腹泻的频率；③母乳低聚糖可以为婴儿提供大脑发育和认知的必需营养素。

2’-岩藻糖基乳糖是众多母乳低聚糖中结构最简单但含量最丰富的一种。研究表明，2’-岩藻糖基乳糖的含量变化影响母乳对婴儿的有益作用，低2’-岩藻糖基乳糖含量的母乳会导致婴儿更容易发生腹泻。因此，检测各种样本中2’-岩藻糖基乳糖的含量是非常重要的，同时对2’-岩藻糖基乳糖的检测在其工业生产中也有重要意义。

目前，2’-岩藻糖基乳糖的定量测定方法有高效液相色谱法、超高效液相色谱法-荧光检测法(UHPLC-FLD)、液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)、多孔石墨化碳液相色谱-质谱/质谱(PCG-LC-MS/MS)、毛细管电泳-电喷雾电离-质谱/质谱(CE-ESI-MS/MS)、高效阴离子交换色谱-脉冲电化学检测法(HPAEC-PAD)等。而上述检测方法均使用精密仪器设备，成本较高，并且检测步骤复杂，所用时间长。因此，需要提供一种简单、快速检测2’-岩藻糖基乳糖的方法。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种酶法快速检测2’-岩藻糖基乳糖的方法，具有操作简单，灵敏度高、准确率高的特点。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

一种酶法快速检测2’-岩藻糖基乳糖的方法，包括以下步骤：配置不同浓度的2’-岩藻糖基乳糖标准品，将所述标准品与α1,2-岩藻糖苷酶在磷酸缓冲液中反应后，加入L-岩藻糖脱氢酶和NADP+，在340 nm下测量溶液的吸光度，得到2’-岩藻糖基乳糖浓度和吸光度的标准曲线；按照上述方法测量待测样品在340 nm的吸光度，根据所述标准曲线，得出样品中2’-岩藻糖基乳糖的含量。

优选的，所述α1,2-岩藻糖苷酶的终浓度为0.2~0.8 mg/mL。

优选的，所述磷酸缓冲液的pH值为6.5~7.5。

优选的，所述标准品与α1,2-岩藻糖苷酶反应的温度为35~40℃，时间为50~70min。

优选的，所述L-岩藻糖脱氢酶的终浓度为0.2~0.8 mg/mL。

优选的，所述NADP+的终浓度为10~20mM。

优选的，所述α1,2-岩藻糖苷酶和所述L-岩藻糖脱氢酶的制备方法包括：将α1,2-岩藻糖苷酶和L-岩藻糖脱氢酶基因序列分别整合至表达载体pET-30a(+)中，转化至大肠杆菌中得到BL21star-α1,2-FUC和BL21star-FucDH重组菌；分别培养所述重组菌表达所述α1,2-岩藻糖苷酶和L-岩藻糖脱氢酶。

优选的，所述培养过程中，当培养液OD600达到0.5时，添加0.05~0.13 mM异丙基-β-D-硫代半乳糖苷进行诱导，BL21star-α1,2-FUC重组菌于18~22℃诱导3~5h，BL21star-FucDH重组菌于14~17℃诱导10~13h。

优选的，所述待测样品包括奶粉、液态奶、发酵液、洗脱液。