[发明专利]一种酶法快速检测2’-岩藻糖基乳糖的方法

权利要求书

1.一种酶法快速检测2’-岩藻糖基乳糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

配置不同浓度的2’-岩藻糖基乳糖标准品，将所述标准品与α1,2-岩藻糖苷酶在磷酸缓冲液中反应后，加入L-岩藻糖脱氢酶和NADP+，在340 nm下测量溶液的吸光度，得到2’-岩藻糖基乳糖浓度和吸光度的标准曲线；

按照上述方法测量待测样品在340 nm的吸光度，根据所述标准曲线，得出样品中2’-岩藻糖基乳糖的含量；

所述待测样品包括奶粉、液态奶、发酵液、洗脱液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述α1,2-岩藻糖苷酶的终浓度为0.2~0.8mg/mL。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷酸缓冲液的pH值为6.5~7.5。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标准品与α1,2-岩藻糖苷酶反应的温度为35~40℃，时间为50~70min。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述L-岩藻糖脱氢酶的终浓度为0.2~0.8mg/mL。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述NADP+的终浓度为10~20mM。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述α1,2-岩藻糖苷酶和所述L-岩藻糖脱氢酶的制备方法包括：

将α1,2-岩藻糖苷酶和L-岩藻糖脱氢酶基因序列分别整合至表达载体pET-30a(+)中，转化至大肠杆菌中得到BL21star-α1,2-FUC和BL21star-FucDH重组菌；分别培养所述重组菌表达所述α1,2-岩藻糖苷酶和L-岩藻糖脱氢酶。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述培养过程中，当培养液OD600达到0.5时，添加0.05~0.13 mM异丙基-β-D-硫代半乳糖苷进行诱导，BL21star-α1,2-FUC重组菌于18~22℃诱导3~5h，BL21star-FucDH重组菌于14~17℃诱导10~13h。

9.一种快速检测2’-岩藻糖基乳糖的试剂盒，其特征在于，包括α1,2-岩藻糖苷酶、L-岩藻糖脱氢酶、NADP+、磷酸缓冲液和2’-岩藻糖基乳糖标准品。