[发明专利]一种大肠杆菌全局调控因子环腺苷酸受体蛋白突变体、基因工程菌及应用

权利要求书

1.一种大肠杆菌全局调控因子环腺苷酸受体蛋白突变体，氨基酸序列如SEQ ID No.1或SEQ ID No.3所示。

2.如权利要求1所述大肠杆菌全局调控因子环腺苷酸受体蛋白突变体的编码基因。

3.如权利要求2所述编码基因，其特征在于，基因序列如SEQ ID No.2或SEQ ID No.4所示。

4.如权利要求1所述大肠杆菌全局调控因子环腺苷酸受体蛋白突变体、如权利要求2或3所述编码基因在由半纤维素水解液生产木糖醇中的应用。

5.如权利要求1所述大肠杆菌全局调控因子环腺苷酸受体蛋白突变体、如权利要求2或3所述编码基因在增强大肠杆菌对焦糖色素及乙酸盐耐受性中的应用。

6.一种基因工程菌，其特征在于，由大肠杆菌菌株IS5-5G将环腺苷酸受体蛋白83位氨基酸S突变为H、127位G突变为I、128位S突变为P或由大肠杆菌菌株IS5-5G将环腺苷酸受体蛋白83位氨基酸S突变为H、128位S突变为P得到；

所述大肠杆菌菌株IS5-5G是由大肠杆菌W3110敲除了ptsG基因、ptsF基因、xylA基因和xylB基因，再在大肠杆菌基因组IS序列整合5个拷贝的木糖还原酶表达模块，最后将大肠杆菌的环腺苷酸受体蛋白112位氨基酸I突变为L、127位T突变为G、144位A突变为T得到。

7.如权利要求6所述的基因工程菌在生产木糖醇中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，生产木糖醇的原料为石灰预处理的玉米芯水解液。

9.一种生产木糖醇的发酵工艺，其特征在于，使用权利要求1所述的大肠杆菌全局调控因子环腺苷酸受体蛋白突变体、权利要求2或3所述编码基因、或权利要求6所述的基因工程菌发酵生产木糖醇。

10.如权利要求9所述的发酵工艺，其特征在于，具体步骤包括：

(1)活化培养：将含有权利要求1所述的大肠杆菌全局调控因子环腺苷酸受体蛋白突变体的菌株、含有权利要求2或3所述编码基因的菌株、或权利要求6所述的基因工程菌接种到平板培养基上活化培养，得到活化菌；

(2)种子培养：将步骤(1)得到的活化菌接种于种子培养基进行种子培养，得到种子液；

(3)将种子液接种到发酵培养基中发酵生产木糖醇，控制溶氧为35～40％；玉米芯水解液第一次补料是以恒定流速在2h内流加入灭菌的玉米芯水解液，控制木糖浓度达到50g/L；当木糖浓度低于40g/L时，开始第二批连续流加玉米芯水解液补料，初始流加木糖的速度为4g/L/h，控制木糖浓度在30～40g/L；当发酵液pH上升至8、且溶氧超过70％时，葡萄糖耗尽，木糖小于2g/L时，到达发酵终点。