[发明专利]一种采用EMS诱变创制观赏凤梨新品种的方法

说明书

本发明属于凤梨育种技术领域，具体为一种采用EMS诱变创制观赏凤梨新品种的方法。本发明以‘台农11’凤梨的幼嫩侧枝作为外植体，建立无菌组培体系，采用组织培养技术和EMS诱变相结合的方法获得EMS诱变植株。该方法得到的EMS诱变植株株型秀美，颇具观赏价值。

技术领域

本发明属于凤梨育种技术领域，具体涉及一种采用EMS诱变创制观赏凤梨新品种的方法。

背景技术

观赏凤梨为凤梨科（Bromeliaceae）观赏植物，原产于美洲的热带和亚热带地区，其株型独特，叶形优美，花型花色丰富漂亮，花期长，观花观叶俱佳，而且绝大部分耐阴，适合室内长期摆设观赏，是极为理想的室内观赏植物，在全世界深受人们的喜爱，是一种有较大发展前景和名符其实的名优高档礼品盆花。随着观赏凤梨的大批量引进和国产化栽培，相关的研究也逐渐受到关注。

遗传材料创制对于生物科学的发展具有十分重要的作用，诱导植物产生变异，构建突变体库， 从中筛选目标突变体，可以为植物基因功能研究提供丰富的基础材料。甲基磺酸乙酯（EMS，Ethyl Methane Sulfonate）是目前种质资源创新工作中使用最广泛的化学诱变剂，具有诱变成本低、操作简单便利、突变率高、对材料的损伤小、不易引起染色体畸变、突变谱较广等诸多特点。据目前研究报道小麦 EMS 诱变通常是利用种子进行诱变处理，也有部分利用愈伤组织等进行诱变处理的报道，采用的诱变方法主要有滴液法、浸泡法、共培养法。然而，目前尚未有用EMS诱变凤梨植物突变体构建观赏凤梨新品种的方法的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是提供一种通过EMS诱变创制诱导凤梨突变体的方法，创制特殊突变材料，从而丰富凤梨的遗传多样性，以及提高凤梨作为观赏植物的观赏价值，并从中筛选出优异的具有观赏性的凤梨种质资源。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种采用EMS诱变创制观赏凤梨新品种的方法，其特征在于：所述方法具体包括以下步骤：

1）试验材料的选取：

选用一年以上台农11菠萝植株的幼嫩侧枝进行组织培养体系的建立，将幼嫩侧枝剪切成长2cm的茎段，以制作好的茎段作为组织培养的外植体；

2）无菌外植体的制作：

将外植体进行消毒处理：5%百菌清浸泡过夜→清水冲洗10分钟→洗洁精稀释液清洗3小时→清水冲洗直至洗净外植体表面泡沫→75%酒精清洗5分钟→无菌蒸馏水清洗3遍→0.1%氯化汞消毒10分钟→灭菌蒸馏水清洗3遍，将消毒后的外植体放在无菌滤纸上自然晾干；

3）愈伤组织诱导：

将晾干后的外植体叶片切成2cm²的方块，接种到愈伤组织诱导培养基中，轻轻按压使外植体贴合培养基，放置于培养室中培养60 d形成愈伤组织；培养条件为：温度为32℃~35℃，湿度为80%，光照强度40 μmol·m^-2·s^-1，光照时间8h/d；

4）EMS诱导：

将存活的愈伤组织切成长度为2 cm的段状浸泡于体积比浓度0.6%的EMS-磷酸缓冲液中，在20 ℃、30 r/min条件下震荡处理6 h，处理完成后加入终浓度为5%的Na₂S₂O₃】以终止反应，再将愈伤组织用灭菌超纯水清洗3次，清洗过的愈伤组织放置于滤纸上自然晾干；

5）不定芽诱导分化：

将EMS诱导处理后的愈伤组织接种到不定芽诱导分化培养基中，放置于培养室中培养45 d形成不定芽；培养条件为：温度为32℃~35℃，湿度为80%，光照强度40 μmol·m^-2·s^-1，光照时间8h/d；

6）生根诱导：