[发明专利]一种采用EMS诱变创制观赏凤梨新品种的方法

权利要求书

1.一种采用EMS诱变创制观赏凤梨新品种的方法，其特征在于：所述方法具体包括以下步骤：

1）试验材料的选取：

选用一年以上台农11菠萝植株的幼嫩侧枝进行组织培养体系的建立，将幼嫩侧枝剪切成长2cm的茎段，以制作好的茎段作为组织培养的外植体；

2）无菌外植体的制作：

将外植体进行消毒处理：5%百菌清浸泡过夜→清水冲洗10分钟→洗洁精稀释液清洗3小时→清水冲洗直至洗净外植体表面泡沫→75%酒精清洗5分钟→无菌蒸馏水清洗3遍→0.1%氯化汞消毒10分钟→灭菌蒸馏水清洗3遍，将消毒后的外植体放在无菌滤纸上自然晾干；

3）愈伤组织诱导：

将晾干后的外植体叶片切成2cm²的方块，接种到愈伤组织诱导培养基中，轻轻按压使外植体贴合培养基，放置于培养室中培养60 d形成愈伤组织；培养条件为：温度为32℃~35℃，湿度为80%，光照强度40 μmol·m^-2·s^-1，光照时间8h/d；

4）EMS诱导：

将存活的愈伤组织切成长度为2 cm的段状浸泡于体积比浓度0.6%的EMS-磷酸缓冲液中，在20 ℃、30 r/min条件下震荡处理6 h，处理完成后加入终浓度为5%的Na₂S₂O₃以终止反应，再将愈伤组织用灭菌超纯水清洗3次，清洗过的愈伤组织放置于滤纸上自然晾干；

5）不定芽诱导分化：

将EMS诱导处理后的愈伤组织接种到不定芽诱导分化培养基中，放置于培养室中培养45d形成不定芽；培养条件为：温度为32℃~35℃，湿度为80%，光照强度40 μmol·m^-2·s^-1，光照时间8h/d；

6）生根诱导：

将不定芽诱导培养的长成的健壮的凤梨组培苗接种于生根诱导培养基中，放置于培养室中培养30 d诱导生根；培养条件为：温度为32℃~35℃，湿度为80%，光照强度40 μmol·m^-2·s^-1，光照时间8h/d；

7）促根壮苗培养：

经诱导培养获得根长3 cm以上的凤梨组培苗转接到促根壮苗培养基中，放置于培养室中培养30 d获得根系发达健壮的凤梨组培苗完整植株；

8）炼苗移栽

获得根系发达健壮的凤梨组培苗完整植株后，将培养瓶移到室外遮阴蓬下进行强光闭瓶练苗15天，遮阴度宜为50%~70%，然后打开瓶口再继续放置5天，再将组培苗移入营养土中培养。

2.根据权利要求1所述的采用EMS诱变创制观赏凤梨新品种的方法，其特征在于：所述愈伤组织诱导培养基配方为：MS粉末4.43g/L+蔗糖30g/L+植物凝胶3g/L+BAP 4mg/L+NAA0.2mg/L，pH值为5.8。

3.根据权利要求1所述的采用EMS诱变创制观赏凤梨新品种的方法，其特征在于：所述EMS-磷酸缓冲液是以磷酸缓冲液为溶剂，将化学诱变剂甲基磺酸乙酯EMS稀释到体积比浓度0.6%；其中，磷酸缓冲液的摩尔浓度为0.1 mol/L，pH值为5.8。

4.根据权利要求1所述的采用EMS诱变创制观赏凤梨新品种的方法，其特征在于：所述不定芽诱导分化培养基配方为MS粉末4.43g/L+蔗糖30g/L+植物凝胶3g/L+BAP 1mg/L+NAA0.2mg/L，pH值为5.8。

5.根据权利要求1所述的采用EMS诱变创制观赏凤梨新品种的方法，其特征在于：所述生根诱导培养基配方为MS粉末4.43g/L+蔗糖30g/L，pH值为5.8。

6.根据权利要求1所述的采用EMS诱变创制观赏凤梨新品种的方法，其特征在于：所述促根壮苗培养基配方为MS粉末4.43g/L+蔗糖30g/L+植物凝胶3g/L+NAA 0.2mg/L，pH值为5.8。