[发明专利]一种菠萝泛菌固态菌剂的保存方法

说明书

本发明涉及涉及微生物技术领域，具体涉及一种菠萝泛菌固态菌剂的保存方法。所述保存方法具体为：将菠萝泛菌固态菌剂与固体载体混合，搅拌均匀，室温条件下静置培养24~48h后，真空密封包装，置于20~25℃干燥处保存；其中，所述固体载体由40重量份麸皮、25重量份玉米芯、15重量份椰壳15和20重量份硅藻土组成。本发明的保存方法操作简便，容易实施，并且能够长期有效保存菠萝泛菌固态菌剂的活力，保本发存12个月后有效活菌数达2.8×10¹² cfu/g。利用本发明的保存方法制备的菠萝泛菌菌剂，对雷公藤有明显的促生作用，能够明显提高雷公藤叶绿素含量、甲素含量及生物量，值得大力推广。

技术领域

本发明涉及涉及微生物技术领域，具体涉及一种菠萝泛菌固态菌剂的保存方法。

背景技术

由于具有多种药理活性，加之又是天然生物原料，雷公藤已成为目前国内外研究中最热门的中药材之一。但是，药物需求的急剧增加，也造成了对雷公藤天然资源的掠夺性开发，使的雷公藤资源面临枯竭。由于植物次生代谢产物具有极其复杂的化学结构，至今仍没有找到有效的或经济的合成方法。因此，人工栽培雷公藤已成为当前满足市场需求，保护自然资源的重要手段。然而，大部分雷公藤植物原料的还是来源于散户种植，由于缺乏科学的技术指导，农药化肥的过量滥用现象，使其无论是在产量还是品质上都受到了影响，出现了不同程度的污染物超标、品种退化、抗病虫和草害能力严重下降等问题，导致出产的雷公藤原料经济效益并不高。因而，加强雷公藤种植的规范化程度，开发出具有实际应用价值的高效、安全的绿色微生物制剂，以提高我省雷公藤的产量、改善其品质、将资源优势转化为经济优势，对于实现我省雷公藤产业的快速发展就显得尤为必要。

植物内生菌是指那些在其生活史中的某一段或全部时期生活在植物组织内，对植物组织没有引起明显病害症状的菌。已有的研究表明，内生真菌长期生活在植物体内的特殊环境中并与宿主协同进化，其对宿主植物的生长和生理生化均会产生重要的影响。目前，内生菌在促进作物生长、病害防治、虫害防治、线虫防治和抗非生物胁迫等方面的应用研究均取得一定的进展，而通过研究内生菌与作物之间的相互作用，内生菌对作物的生物学功能已经得到证实。而在药用植物方面，一些内生菌除了具有益生功能之外，自身还可以产生或促进宿主药用活性物质的积累，如果将其转接进入植物体内，不但可以提高中药材的产量还可以增加其有效成分含量，提升其“道地”品质。然而，由于内生菌均筛选自植物体内，对外界环境条件相对敏感，如何长期保藏并维持一定的菌体活性是影响其应用的重要因素。

发明内容

本发明的目的在于提供一种菠萝泛菌固态菌剂的保存方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明首先提供了一种菠萝泛菌固态菌剂的保存方法，其是将菠萝泛菌固态菌剂与固体载体混合，搅拌均匀，室温条件下静置培养24~48h后，真空密封包装，置于20~25℃干燥处保存；其中，所述固体载体由40重量份麸皮、25重量份玉米芯、15重量份椰壳15和20重量份硅藻土组成。

进一步的，上述的菠萝泛菌固态菌剂与固体载体的重量比为1:20。

进一步的，上述的菠萝泛菌固态菌剂的制备方法包括如下步骤：

1）将低温保存的菠萝泛菌接种到LB固体培养基上，于30℃条件下倒置培养36 h，挑取单菌落接种到LB液体培养基中，30℃、180 rpm条件下培养24 h，得到种子液；

2）将种子液以1vol%的接种量接种至LB液体培养基中，在30℃、180 rpm条件下发酵培养36 h，随后将发酵液在4℃、4000g条件下离心20分钟，收集菌体沉淀，用无菌水将菌体沉淀重悬配制成浓度为1.0×10⁹ cfu/mL的菌悬液；

3）取1L菌悬液，向其中添加320g冻干保护剂，搅拌混匀后进行预冻；预冻结束后真空冷冻干燥，得到菌种冻干粉，即为菠萝泛菌LY-3固态菌剂。