[发明专利]一种菠萝泛菌固态菌剂的保存方法

权利要求书

1.一种菠萝泛菌固态菌剂的保存方法，其特征在于：将菠萝泛菌固态菌剂与固体载体混合，搅拌均匀，室温条件下静置培养24~48h后，真空密封包装，置于20~25℃干燥处保存；其中，所述固体载体由40重量份麸皮、25重量份玉米芯、15重量份椰壳15和20重量份硅藻土组成。

2.根据权利要求1所述的一种菠萝泛菌固态菌剂的保存方法，其特征在于：所述的菠萝泛菌固态菌剂与固体载体的重量比为1:20。

3.根据权利要求1所述的一种菠萝泛菌固态菌剂的保存方法，其特征在于：所述的菠萝泛菌固态菌剂的制备方法包括如下步骤：

1）将低温保存的菠萝泛菌接种到LB固体培养基上，于30℃条件下倒置培养36 h，挑取单菌落接种到LB液体培养基中，30℃、180 rpm条件下培养24 h，得到种子液；

2）将种子液以1vol%的接种量接种至LB液体培养基中，在30℃、180 rpm条件下发酵培养36h，随后将发酵液在4℃、4000g条件下离心20分钟，收集菌体沉淀，用无菌水将菌体沉淀重悬配制成浓度不低于1.0×10⁸ cfu/mL的菌悬液；

3）取1L菌悬液，向其中添加320g冻干保护剂，搅拌混匀后进行预冻；预冻结束后真空冷冻干燥，得到菌种冻干粉，即为菠萝泛菌LY-3固态菌剂。

4.根据权利要求3所述的一种菠萝泛菌固态菌剂的保存方法，10其特征在于：所述的菠萝泛菌为菠萝泛菌（Pantoea ananatis）LY-3，其已于2013年3月27日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.7371。

5.根据权利要求3所述的一种菠萝泛菌固态菌剂的保存方法，其特征在于：所述的冻干保护剂由100重量份脱脂奶粉、120重量份海藻酸钠和100重量份甘油组成。

6.根据权利要求3所述的一种菠萝泛菌固态菌剂的保存方法，其特征在于：所述的预冻的具体方法为：设置降温速率为0.3℃/min，冷却至-20℃，恒温预冻12h。

7.根据权利要求3所述的一种菠萝泛菌固态菌剂的保存方法，其特征在于：所述的真空冷冻干燥的具体方法为：预冻结束后开启真空泵进行抽真空，在真空度达到20 pa时，维持此真空度并以1℃/30min的速率升温，样品升温至5℃时，保持24小时，结束冻干过程。

8.权利要求1所述的保存方法在制备提高雷公藤叶绿素含量的微生物菌剂中的应用。

9.权利要求1所述的保存方法在制备提高雷公藤甲素含量的微生物菌剂中的应用。

10.权利要求1所述的保存方法在制备提高雷公藤生物量的微生物菌剂中的应用。