[发明专利]提取DNA的试剂盒及DNA提取方法

说明书

本发明公开了一种提取DNA的试剂盒，包括裂解液、萃取棒、清洗液、洗脱液；裂解液用于裂解生物样品；萃取棒用于萃取生物样品中的DNA，该萃取棒包括棒体、固定在棒体外壁上的复合膜，该复合膜包括硝酸纤维膜和粘附在硝酸纤维膜上的吸附材料M‑UIO‑66‑NH₂；洗脱液用于将复合膜上吸附的DNA洗脱下来。适用于设备条件简陋的现场检测。本发明还公开DNA提取方法，能够快速提取DNA，适用于现场检测。

技术领域

本发明涉及核酸提取技术领域，尤其是涉及一种提取DNA的试剂盒及DNA提取方法。

背景技术

在食品中，尤其在肉类食品这一类里，经常有媒体报道肉类掺假事件，例如往高价肉制品经常掺入劣质或低成本肉。其它的肉类掺假手段包括使用其它动物物种、组织、蛋白质替代肉类原料；伪造肉类产地和动物饲养制度(特别是在涉及传统/区域肉类产品时)；修改加工方法和添加非肉类成分。

迄今为止，有很多用于鉴别肉类掺假的分析方法，它们主要基于靶蛋白分析，例如，光谱法、质谱法、色谱法、电泳法和免疫分析法等代表性方法都是使用特定的蛋白质作为目标检测指标，其中一些已经成功商业化，成为常规分析或监测的测试试剂盒或设备。然而，这些分析方法还是存在不足之处，例如在样品预处理过程中或加工食品中会使蛋白质变性，还有高成本，严格的操作环境，有限的资源都会极大地阻碍了这些方法的实际应用。与其它技术相比，基于核酸的(分子)分析技术具有更多的优势，例如更高的检测灵敏度、更高的修饰灵活性、特异性和更快的检测结果。

脱氧核糖核酸(DNA)在生物体内的含量较低。因而，高效、简便的DNA提取方法是影响后续分子生物技术如测序、变异分析、克隆等质量的重要一环。就技术而言，基于DNA的检测过程主要包括三个部分：DNA提取、DNA扩增和结果判断，建立基于DNA的现场快速检测技术则是将这三个部分有机融合。DNA提取是分子检测的前提和先决条件，良好的提取方法是检测成功的关键。目前DNA提取和纯化的方法主要分为液液萃取和固相萃取两类。液液萃取(Liquid-liquid extraction,LLE)是一种基于有机溶剂的提取方法，基于对水溶液pH值的操纵，将DNA提取到有机溶剂中，是经典的DNA提取纯化方法，其获得的DNA纯度高、浓度高。但该类方法使用多种有机试剂，且提取时间长，不适用于现场检测。固相萃取(Solid phaseextraction,SPE)主要基于材料作为DNA的吸附剂，并在特定条件下实现DNA的“结合释放”。因此，需要具有DNA结合能力强的材料。在此之前，有很多材料用于DNA吸附，例如磁性纳米颗粒(MNP)、二氧化硅、无机非金属材料的聚合物等。目前，市场上有许多以硅胶柱和磁珠为基础的核酸提取试剂盒，这些试剂盒的应用减少了实验操作对工作人员的健康风险，也降低了对实验设备的特殊要求。但是，对其它提取DNA的试剂盒和DNA提取方法研究相对较少。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是针对现有技术的现状，提供一种适用于现场检测的快速提取DNA的试剂盒。

本发明所要解决的第二个技术问题是针对现有技术的现状，提供一种应用有上述应用有提取DNA的试剂盒的DNA提取方法，适用于现场检测。

本发明解决上述第一个技术问题所采用的技术方案为：一种提取DNA的试剂盒，其特征在于：包括

裂解液，用于裂解生物样品；

萃取棒，用于萃取裂解液中的DNA，该萃取棒包括棒体、固定在棒体外壁上的复合膜，该复合膜包括硝酸纤维膜和粘附在硝酸纤维膜上的吸附材料M-UIO-66-NH₂；

清洗液，用于去除萃取棒上除DNA外的其余杂质；

洗脱液，用于将复合膜上吸附的DNA洗脱下来。

棒体和硝酸纤维膜固定的方式也可以有多种，优选地，所述棒体和复合膜之间粘接固定。也可以通过卡接、限位等方式实现两者的固定。