[发明专利]一种赭鹿花菌分子身份证及其扩增引物、检测试剂盒和物种鉴定方法

说明书

本发明提供了一种赭鹿花菌分子身份证及其扩增引物、检测试剂盒和物种鉴定方法，属于物种鉴定技术领域。本发明基于DNAmini‑barcode技术开发出一种赭鹿花菌分子身份证，可有效鉴定赭鹿花菌物种，并且具有超高的检测灵敏度。本发明还基于赭鹿花菌分子身份证设计得到一对特异性引物，利用所述引物进行检测，可大大的降低了误食赭鹿花菌的检测时间和成本，且操作便利。可见本发明提供鉴定方法为蘑菇中毒事件的现场快速实时检测提供了基础，同时进一步完善了蘑菇产品质量与安全的监督检测体系。

技术领域

本发明属于物种鉴定技术领域，具体涉及一种赭鹿花菌分子身份证及其扩增引物、检测试剂盒和物种鉴定方法。

背景技术

赭鹿花菌(Gyromitra infula(Schaeff.)Quél.)是一种易被误食的有毒蘑菇，在我国不同地区夏秋季均有分布，与可食用的马鞍菌(粗柄马鞍菌Helvella macropus(Pers.)P.Karst.)极为相似，易与其混淆发生误食中毒。它含有鹿花菌素和水解产物甲基联胺，可溶解和破坏红细胞，进而引起急性溶血。赭鹿花菌中毒事件一旦发生，快速检测和鉴定赭鹿花菌对于蘑菇中毒事件的调查、中毒患者的救助就会显得尤为重要和迫切(李海蛟等，2020)。

蘑菇中毒在临床治疗和法医学分析过程中，需要从剩余物、煮熟的蘑菇、呕吐物或者胃提取物中取得样本用于检测。由于高温、高压和胃液的消化会引起DNA的降解和碎片化(Goldstein and Desalle,2003)。Meusnier等人发现COI序列中短于250bp的基因片段鉴定成功率在90％以上，因此提出使用“mini-barcode”的方法来解决处理过后的样品DNA降解问题。随后，越来越多的研究学者表明短于300bp的基因片段不会影响对降解的DNA的检测反而比全长的基因序列更容易扩增。目前基于DNA mini-barcode技术，韩建萍课题组首次提出了中药材分子身份证的概念。分子身份证指一段极短(20-50bp)且物种特异的DNA序列，该序列仅存在于目标物种的基因组中，用于鉴定混合DNA样品中的某种特定样品。由于分子身份证技术具有鉴定效率高、特异性强等特征，因此，非常适用于有毒蘑菇的鉴定及快速检测。

然而分子身份证越段其携带的特异性的DNA分子信息越少，对成功准确鉴定物种越困难。目前尚未有关于准确表征赭鹿花菌的分子身份证的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种赭鹿花菌分子身份证及其扩增引物、检测试剂盒和物种鉴定方法，可以快速准确地检测中毒事件中的有毒蘑菇是否含有赭鹿花菌，为后续快速治疗提供依据。

本发明提供了一种赭鹿花菌分子身份证，赭鹿花菌分子身份证的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示或与SEQ ID NO:1互补的序列。

本发明提供了一种特异性扩增所述赭鹿花菌分子身份证的引物，包括核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的反向引物。

本发明提供了一种鉴定赭鹿花菌的检测试剂盒，包括所述引物和检测试剂。

优选的，所述检测试剂包括PCR扩增用试剂。

优选的，所述检测试剂盒还包括阳性标准品；

所述阳性标准品为所述赭鹿花菌分子身份证。

本发明提供了一种赭鹿花菌的物种鉴定方法，包括以下步骤：

1)提取待检测样本的基因组DNA；

2)以步骤1)中所述基因组DNA为模板，用所述引物进行PCR扩增，得到PCR产物；

3)将所述PCR产物进行电泳和测序，得到122bp的序列判断待检测样本为赭鹿花菌。