[发明专利]一种全自动化小鼠骨髓冲洗装置及其骨髓细胞提取方法

说明书

本发明公开了一种全自动化小鼠骨髓冲洗装置及其骨髓细胞提取方法，该装置包括PCL控制器、电源管理模块、微型泵、电磁阀组、清洗液储箱、电动剪组件、第一电动丝杆组件和第二电动丝杆组件，通过PCL控制器编程控制电动剪组件自动剪切骨骺操作、第一电动丝杆组件和第二电动丝杆组件相互配合运行来完成骨骺的剪切、股骨和/或胫骨的移动、收集腔及收集槽的进行自主化冲洗，为降低污染几率、简化实验步骤提供便捷性操作。本发明利用球形过滤罩将骨骺裁剪和液体过滤，有利于后续的骨髓细胞的培养。本发明方法操作简便、高效，不易污染细胞，不易损伤细胞，能获得大量活性较佳的小鼠骨髓细胞，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物学实验中骨髓提取设备的技术领域，具体涉及为一种全自动化小鼠骨髓冲洗装置及其骨髓细胞提取方法。

背景技术

游离小鼠骨髓细胞是细胞学研究中的必要操作步骤。骨髓细胞包括基质细胞和造血细胞，而造血干细胞是血液系统中具有长期自我更新能力和分化成各类成熟血细胞潜能的成体干细胞，故分离骨髓细胞是血液系统疾病、免疫系统疾病进行科学研究的基础。同时，骨髓间充干细胞具有多向分化的潜能，更是成为心血管、神经、内分泌、口腔等多学科的研究热点。如何高效分离骨髓细胞已成为困扰众多科研人员的重要问题。

现实由于正常人以及病人样本获得途径的局限，因此采用模式生物展开研究就显现的尤为必要。其中小鼠是使用最多遗传背景研究最为广泛的模式生物。无论是干细胞研究还是血液病领域的研究，从小鼠四肢骨中提取骨髓都是科研中经常要涉及到的实验环节。

目前，常规骨髓提取方法有两种：第一、注射器法，即将小鼠胫骨或股骨的两骺剪掉，暴露骨髓腔，然后用细胞培养基将骨髓冲出，但是使用该方法会导致大量骨髓丢失，提取时间较长，效率低下，细胞的活力下降，镊子剪刀等器械使用较多，细胞易污染，严重影响研究效率；第二、骨髓直接穿刺法，即用穿刺针穿刺下肢骨，抽吸骨髓，由于小鼠四肢短小且骨髓量少，很难进行穿刺操作，即便可以，仍需多次进行，且过程繁琐，穿刺出的骨髓细胞损伤严重，数量稀少。

现有公开的论文中，2011年4月2日，付必莽等在《中国组织工程研究与临床康复》中的第15卷第14期发表“逆向解剖法游离股骨/胫骨快捷制备小鼠骨髓细胞”，作者虽然采用逆肌肉走向以剪刀剪合力游离肌肉，适当用力即可使肌肉完整剥离，特别是膝关节处采取与关节运动反方向折转动作，使得股骨和胫骨干骺端游离后即很洁净，该逆向解剖法在一定程度上虽然可以解决肌肉去除不干净或折断骨骼、造成污染等问题，但也同样遇到常规骨髓提取方法存在诸多问题。

现有公开的专利文献中，2021年4月6日公开的一种血液内科用的骨髓提取装置（申请公布号：CN112603387A），该专利公开的技术方案虽然也是骨髓提取的装置，且在一定程度上可以简化工作人员操作步骤，但对于小鼠四肢骨中提取骨髓的适用性和借鉴性并没有任何参考价值。

2022年10月22日公开的一种小鼠骨髓细胞提取装置（授权公告号：CN214437150U），该专利公开的技术方案“其包括离心收集管、离心容器以及过滤机构，离心容器固定至离心收集管内，过滤机构固定至所述离心收集管内且围绕所述离心容器的外侧设置以收集过滤自所述离心容器离心后的骨髓细胞”旨在解决骨髓细胞提取方法对骨髓细胞提取难度较大、提取不纯的技术问题，只是解决上述常规骨髓提取方法中骨髓收集量少的问题，但是常规骨髓提取方法中其他问题并没记载相关的技术方案来解决，因此，该专利的技术方案远远不能满足小鼠股骨或胫骨的骨髓提取要求。