[发明专利]一种体外快速扩增红细胞技术

权利要求书

1.一种体外快速扩增红细胞技术，其特征在于使用IL-β、PEG2以及TGF-β因子组合（IPT）,可以增加早期红系祖细胞的增殖，显著加速红细胞分化和脱核，从而加快正常成熟去核红细胞的生成。

2.根据权利要求1所述的一种体外快速扩增红细胞技术，其特征在于IL-β、PEG2以及TGF-β使用浓度分别为10ng/ml、5ng/ml以及30pg/ml。

3.根据权利要求1所述的一种体外快速扩增红细胞技术，其特征在于：其使用方法包括如下步骤：

步骤一： 脐带血单个核细胞（MNC）的分离，使用三一造血免疫磁珠法（#FLOSEP-C-034）分离CD34+造血干细胞；

步骤二： CD34+细胞以5x10⁴/ml铺瓶，培养液为P1培养液，以IMDM培养基（Gibco公司）为基础培养基配制，含EPO（sigma公司，3-6U/ml）， INSULIN（sigma公司，50-100ng/ml）、SCF（RD公司，50-100ng/ml）、DEX（SIGMA公司，5-10µM）、IL-3 （sigma公司，5ng/ml）、Heparin（sigma公司，2U/ml）、IL-1β（prepotech 10ng/ml）、PEG2（sigma公司，5ng/ml）、TGF-β（特宝30pg/ml）置37°C 含5% CO₂条件培养，隔天补液；

步骤三：第8天细胞经洗涤去上清后以1x10⁶/ml转入生物反应器，培养液为P3培养液以IMDM培养基（Gibco公司）为基础培养基配制，含EPO（sigma公司，3-6U/ml）、SCF（RD公司，50-100ng/ml）、DEX（SIGMA公司，5-10µM）、Heparin（sigma公司，2U/ml）、IL-1β（prepotech10ng/ml）、PEG2（sigma公司，5ng/ml）、TGF-β（特宝 30pg/ml）；

步骤四：第11天换用以IMDM培养基（Gibco公司）为基础培养基配制的培养液，含DEX（SIGMA公司，5-10µM）、Heparin（sigma公司，2U/ml）；

步骤五：D14天收集中间产物及终产物进行细胞增殖倍数，红系细胞形态，血红蛋白类型，变形性，红细胞培养密度等分析。