[发明专利]一种基于荧光免疫微球的微生物检查法

权利要求书

1.一种基于荧光免疫微球的微生物检查法，其特征是，包括以下步骤：

（1）将荧光量子点溶解于有机溶剂中，再加入溶胀后的超顺磁珠反应一段时间后去除上述混合液中的溶剂，得到荧光超顺磁珠；

（2）将荧光超顺磁珠活化后与待测微生物抗体混合进行孵育，然后封闭处理得到荧光免疫磁珠；

（3）将待测样品与细菌荧光染液或真菌荧光染液混合，再加入荧光免疫磁珠混合孵育，磁分离洗涤后作为待测液加入孔板中观察捕获微生物的荧光免疫磁珠的荧光。

2.根据权利要求1所述的一种基于荧光免疫微球的微生物检查法，其特征是，所述步骤（1）为将荧光量子点溶解于有机溶剂中，再加入溶胀后的超顺磁珠震荡3-4h，旋蒸除去有机溶剂后得到荧光超顺磁珠。

3.根据权利要求1所述的一种基于荧光免疫微球的微生物检查法，其特征是，所述步骤（1）中超顺磁珠为羧基磁珠，粒径为10nm-10μm。

4.根据权利要求1或3所述的一种基于荧光免疫微球的微生物检查法，其特征是，所述步骤（2）中荧光超顺磁珠的活化过程为，向荧光超顺磁珠依次加入1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基丁二酰亚胺，超声后混合10-15min，活化后用2-（N-吗啉代）乙磺酸缓冲液洗涤。

5.根据权利要求4所述的一种基于荧光免疫微球的微生物检查法，其特征是，所述步骤（2）中荧光超顺磁珠、1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基丁二酰亚胺的质量比为1：（25-30）：（25-30）。

6.根据权利要求1所述的一种基于荧光免疫微球的微生物检查法，其特征是，所述步骤（2）中孵育温度为15-20℃，时间为1-3h。

7.根据权利要求1所述的一种基于荧光免疫微球的微生物检查法，其特征是，所述步骤（2）中封闭过程为将与抗体孵育后的荧光超顺磁珠磁分离，去除上清液后用磁珠封闭液洗涤，再在磁珠封闭液中在25℃下封闭4h。

8.根据权利要求1所述的一种基于荧光免疫微球的微生物检查法，其特征是，所述步骤（3）中细菌荧光染液为荧光染色液吖啶橙，真菌荧光染液为荧光提亮剂28。

9.根据权利要求1所述的一种基于荧光免疫微球的微生物检查法，其特征是，所述步骤（3）中待测样品与荧光免疫磁珠混合孵育过程为旋涡振荡反应10-15min，然后磁分离再用无菌水重悬。

10.根据权利要求1或9所述的一种基于荧光免疫微球的微生物检查法，其特征是，所述步骤（3）中加入待测液的孔板置于磁板上再观察其荧光。