[发明专利]一种交联琼脂糖微球的快速制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种交联琼脂糖微球的快速制备方法及应用，包括以下步骤：水相琼脂糖溶液的制备、油相溶液的制备、连续交联反应和去除环氧氯丙烷，先后用乙醇和纯水交替清洗，去除溶液中的环氧氯丙烷，得到交联琼脂糖微球，粒径范围25~120μm，测定的环氧基密度60~110umol/ml。通过上述方式，本发明所述的交联琼脂糖微球的快速制备方法及应用，可以实现一步法快速制备交联琼脂糖微球，提高了交联琼脂糖微球的生产效率，在对交联琼脂糖微球进行金属镍、烷基化修饰后，可以进一步应用于蛋白纯化和核酸提取过程。

技术领域

本发明涉及琼脂糖微球领域，特别是涉及一种交联琼脂糖微球的快速制备方法及应用。

背景技术

近年来，随着制药技术的提高，市场上对蛋白纯化技术和产品的需求也明显的增加。琼脂糖微球具备有表面多孔、高表面积等有点，被广泛用在了蛋白纯化领域。

申请号为201910198392.X的发明专利申请中公开了一种大粒径琼脂糖微球及其制备方法，其所公开的既有的琼脂糖微球的制备与交联过程，均为先通过调整好油相、水相的比例，搅拌固化后得到琼脂糖微球，待结束反应得到琼脂糖微球后，需要利用石油醚、95乙醇、纯净水重复清洗，方可进入到下一步的交联反应。

而在下一步的交联反应过程，其反应溶剂主要由二氧六环组成，增加了投料、反应清洗步骤以及原料的使用，在工业化投产过程中，不利于快速制备获取交联的琼脂糖微球，从而进一步影响了蛋白的纯化效率，需要进行改进。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种交联琼脂糖微球的快速制备方法及应用，快速制备交联琼脂糖微球，提高交联琼脂糖微球的生产效率，并应用在蛋白纯化和核酸提取的过程。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种交联琼脂糖微球的快速制备方法，包括以下步骤：

S01、水相琼脂糖溶液的制备，将4~6重量份的琼脂糖粉末，分散于100重量份的去离子水中，机械搅拌并加热至100~150℃，至琼脂糖粉末完全融于去离子水中，得到水相琼脂糖溶液；

S02、油相溶液的制备，将10~20重量份的乳化剂，加入200重量份的有机溶剂中，机械搅拌并加热至65~70℃，均匀搅拌15~25分钟，得到油相溶液；

S03、连续交联反应，将水相琼脂糖溶液滴加至油相溶液中，滴加完成后，维持油相溶液温度60~75℃，继续搅拌15~25min，然后以2~3℃/min的降温速率让反应体系降温低于48℃后，再向反应体系中顺序加入10~40重量份的环氧氯丙烷、10~40重量份的8~20mol/L的NaOH溶液和0~30重量份的无水乙醇，提供碱性环境，间隔搅拌8~11min平衡体系，然后升温到45~50℃，继续搅拌反应100~120min；

S04、去除环氧氯丙烷，先后用乙醇和纯水交替清洗，去除溶液中的环氧氯丙烷，并进行环氧氯丙烷的残余检测，得到交联琼脂糖微球，粒径范围25~120μm，用硫代硫酸钠处理并测定环氧基密度60~110umol/ml。

在本发明一个较佳实施例中，所述乳化剂采用span80或span85。

在本发明一个较佳实施例中，所述有机溶剂采用环己烷或液体石蜡。

在本发明一个较佳实施例中，步骤S01中，水相琼脂糖溶液中还分散了3~4重量份的四氧化三铁粉末，得到的交联琼脂糖微球为交联琼脂糖磁珠。

在本发明一个较佳实施例中，步骤S04中，环氧氯丙烷的残余检测包括：取溶液中的上清液，加入硫代硫酸钠溶液和酚酞指示剂，摇匀10min，不显色，即为无环氧氯丙烷。

为解决上述技术问题，本发明采用的另一个技术方案是：提供一种交联琼脂糖微球，根据上述的交联琼脂糖微球的快速制备方法进行制备。

为解决上述技术问题，本发明采用的另一个技术方案是：提供一种交联琼脂糖微球在蛋白纯化方面的应用，包括以下步骤：