[发明专利]一种特异性鉴定嘉兴槜李种质的ISSR分子标记及其应用

说明书

本发明公开了一种特异性鉴定嘉兴槜李种质的ISSR分子标记及其应用，属于生物技术领域。本发明提供了一种ISSR分子标记引物，使用该引物可以简单方便地通过PCR方法来鉴别嘉兴槜李种质。所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，所述ISSR分子标记引物特征在于，序列为：5’‑NAGAGAGAGAGAGAGAGYT‑3’，其中Y＝(C,T),N＝(A,G,C,T)。本发明引物对能够有效鉴别嘉兴槜李种质，且使用PCR的方法与传统的测序等方法相比，检测速度快、成本低、操作简单。

技术领域

本发明涉及一种特异性鉴定嘉兴槜李种质的ISSR分子标记及其应用，属于生物技术领域。

背景技术

槜李(Prunus salicina Lindl.)是蔷薇科(Rosaceae)李属(Prunus L.)植物，原产于浙江省嘉兴市，桐乡槜李于2011年获农产品地理标志保护登记。槜李果实熟透后果肉化成浆液，有酒香味，品质上乘，经济价值高。目前除浙江嘉兴的桐乡、海宁、海盐、湖州等地有槜李栽培外，在江苏、安徽等省也有少量引种。

槜李多采用嫁接繁殖，在不同栽培区域进行引种嫁接，极易造成同名异物及同物异名的现象。另外槜李受不同栽培管理方法、土壤及气候条件的影响，果实在成熟期的生物学特性及品质外观方面呈现一定的差异，市场上鱼目混珠给消费者带来极大困惑。

传统的植物分类方法是借助于对植物形态构造、生活习性等进行比较研究，随着科技的不断进步，植物分类方法逐步发展到分子生物学方法。由于槜李的果实外观受不同栽培管理方法、土壤及气候条件的影响，果实色泽往往不同，仅仅依靠果实形态来区分槜李与其他品种李难度较大，依靠传统的形态分类学方法在嘉兴槜李的鉴别上存在局限性。鉴于嘉兴槜李在地方特产及农业领域的重要地位，针对嘉兴槜李建立一套可靠的分子鉴定方法势在必行，对于嘉兴槜李的种质资源保护具有重要意义。

由于植物性状通常受环境因素和遗传基因的影响导致品种特性发生改变，仅靠形态特征较难区分开来，不利于种质资源保护及开发利用。分子标记技术不受环境条件和植物生长发育的影响，已被广泛用于植物种质资源的遗传多样性及亲缘关系分析，为分子辅助育种提供技术支持。ISSR是由Zietkiewicz等人于1994年创建的一种简单序列重复区间扩增多态性分子标记，具有实验操作快速简单高效、遗传重复性好、多态性高等优点，二十余年来已广泛地应用于品种鉴定、系统发育、分子标记育种等方面。乔玉山及等人用ISSR分子标记对不同李品种进行了遗传多样性分析，指出ISSR标记是进行李种质资源鉴定和遗传多样性研究的有力工具。

发明内容

本发明提供了一种ISSR分子标记引物，使用该引物可以简单方便地通过PCR方法来鉴别嘉兴槜李种质。所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，所述ISSR分子标记引物特征在于，序列为：5’-NAGAGAGAGAGAGAGAGYT-3’，其中Y＝(C,T),N＝(A,G,C,T)。

本发明通过设计和筛选获得一个可以特异性鉴定嘉兴槜李种质的ISSR分子标记，该标记包含一条引物，利用该引物对李品种的基因组DNA进行PCR扩增，通过扩增产物大小的多态性即可鉴定嘉兴槜李种质。

本发明提供了一种ISSR分子标记引物在鉴定嘉兴槜李或在制备鉴定嘉兴槜李的产品中的应用，所述引物序列为：5’-NAGAGAGAGAGAGAGAGYT-3’，其中Y＝(C,T),N＝(A,G,C,T)。

本发明还提供了一种用于嘉兴槜李的分子鉴定试剂盒，所述试剂盒含有上述ISSR分子标记引物，所述引物序列为：5’-NAGAGAGAGAGAGAGAGYT-3’，其中Y＝(C,T),N＝(A,G,C,T)。

在本发明的一种实施方式中，所述试剂盒中还含有PCR扩增所需试剂。