[发明专利]一种注射型吡啶酰胺衍生物小分子原位凝胶制剂的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种注射型吡啶酰胺衍生物小分子原位凝胶制剂的制备方法，包括步骤一，原料选取；步骤二，3,5－吡啶二甲酰氯合成；步骤三，酰胺衍生物的合成；步骤四，产品制备；其特征在于：

其中上述步骤一中，首先按照配方设计称取适量的聚乙二醇和3,5－吡啶二甲酸备用；

其中上述步骤二中，当步骤一中的原料选取完成后，取用100ml的圆底烧瓶，将步骤一中的3,5－吡啶二甲酸加入，随即向烧瓶中加入二氯亚砜与2-4滴引发剂，在65-75℃下进行回流，随后减压蒸馏溶剂后得到3,5－吡啶二酰氯固体待用；

其中上述步骤三中，取用适量的3－氨基吡啶溶解到无水二氯甲烷中备用，制成3,5－吡啶二酰氯溶液备用，随后，称量适量的3－氨基吡啶加入到250ml的圆底烧瓶中，加入无水二氯甲烷作为溶剂溶解，并加入3mL的三乙胺，随后在冰浴条件下逐滴加入上述制得的3,5－吡啶二酰氯溶液，在常温下搅拌反应，然后将溶液抽滤，并用去离子水淋洗多次，60-80℃下真空干燥24小时得到酰胺衍生物PDA-N₃备用；

其中上述步骤四中，当步骤三中的PDA-N₃制备完成后，适量纯化后的酰胺衍生物PDA-N₃加入到步骤一中称取的聚乙二醇中，80-90℃下加热直至完全溶解，冷却后即制成注射型吡啶酰胺衍生物小分子原位凝胶制剂。

2.根据权利要求1所述的一种注射型吡啶酰胺衍生物小分子原位凝胶制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤二中，3,5－吡啶二甲酸和二氯亚砜的摩尔比为1:2，引发剂为N,N－二甲基甲酰胺，反应时间为3.5-4.5h。

3.根据权利要求1所述的一种注射型吡啶酰胺衍生物小分子原位凝胶制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤三中，3,5－吡啶二甲酰氯10mmol，3－氨基吡啶为20mmoL，三乙胺的量为3mL，反应时间为10-24h。

4.根据权利要求1所述的一种注射型吡啶酰胺衍生物小分子原位凝胶制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤四中，聚乙二醇原料选自医用级的PEG200、PEG400和PEG600中的任意一种。

5.根据权利要求1所述的一种注射型吡啶酰胺衍生物小分子原位凝胶制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤四中，纯化处理溶解所用溶剂为二氯甲烷，萃取剂为去离子水。

6.根据权利要求1所述的一种注射型吡啶酰胺衍生物小分子原位凝胶制剂的制备方法，其特征在于：所述步骤四中，纯化的方法为：用乙醇比水重结晶，80℃下真空干燥24h。

7.一种注射型吡啶酰胺衍生物小分子原位凝胶制剂的应用，包括步骤一，浓度设计；步骤二，药物负载；步骤三，检测分析；其特征在于：

其中上述步骤一中，根据不同的治疗需求，设计多种性质的原位凝胶制剂，应用于不同场景，即调整酰胺衍生物PDA-N₃在不同级别聚乙二醇中的含量，得到不同浓度的原位凝胶制剂，加水得到水凝胶，加水之后形成的原位凝胶冷冻干燥后呈纤维状结构，按照上述制备方法制成原位凝胶制剂备用；

其中上述步骤二中，将步骤一中的调整浓度之后的原位凝胶制剂作为注射用药物负载的支架或载体，也可用于靶向缓释治疗药物的负载，用于临床治疗；

其中上述步骤三中，将VB12分别以10mg/L、150mg/L、200mg/L的浓度负载于该种吡啶酰胺衍生物小分子凝胶材料中，每隔一定时间取上层缓冲液，以紫外－可见分光光度法测试，同时将人脐静脉内皮细胞置于干凝胶薄膜沉积的96孔板中，在细胞培养箱中培养，每隔一定时间用5μmol/L的钙黄绿素－AM染色，并用荧光倒置显微镜观察其活力情况，并且用CellCounting Kit-8法对细胞增殖情况进行检测分析，另外，将该吡啶酰胺衍生物小分子物质的PEG溶液注射至小鼠体内，观察其胶凝状态及降解或代谢情况。

8.根据权利要求7所述的一种注射型吡啶酰胺衍生物小分子原位凝胶制剂的应用，其特征在于：所述步骤一中，酰胺衍生物PDA-N₃在聚乙二醇中的浓度为4-20g/L。

9.根据权利要求7所述的一种注射型吡啶酰胺衍生物小分子原位凝胶制剂的应用，其特征在于：所述步骤三中，当溶剂为PEG400时，控制凝胶因子的浓度6g/L，原位凝胶在小鼠体内可保持15天左右；而当凝胶因子为10g/L时，原位凝胶在小鼠体内可保持21天左右，之后被降解或代谢。