[发明专利]靶向沉默辣椒疫霉氧化固醇结合蛋白1的植物表达载体及其应用

权利要求书

1.一种靶向辣椒疫霉氧化固醇结合蛋白1基因并使其沉默的DNA片段，其特征在于，所述DNA片段的序列为序列表中序列1或者序列表中序列2。

2.一种靶向辣椒疫霉氧化固醇结合蛋白1基因并使其沉默的植物表达载体，其特征在于，是由SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示的核酸序列分别以正、反向两次插入到对应的植物表达载体构成；优选的，所述植物表达载体是将如式(I)所示编码基因克隆到出发载体，构成可表达靶向辣椒疫霉纤维素合酶3基因并使其沉默的具有反向互补二级结构的RNA分子的重组表达载体；SEQ正向-X-SEQ反向(I)；式(I)中，所述SEQ正向的序列为序列表中序列1或者序列表中序列2；所述SEQ反向的序列与所述SEQ正向的序列反向互补；所述X是所述SEQ正向与所述SEQ反向之间的间隔序列，所述X与所述SEQ正向及所述SEQ反向均不互补。

3.根据权利要求2所述的植物表达载体，其特征在于，所述出发载体为pEarlyGate100，式(I)中，X为UBC基因内含子或植物丙酮酸磷酸激酶基因内含子，所述UBC基因内含子序列如序列表中序列3的自5’端第3308-3379位核苷酸序列所示。

4.根据权利要求3所述的植物表达载体，其特征在于，所述植物表达载体的构建方法为将序列1或2所述的片段先正向插入pENTR1a质粒得到重组质粒pENTR1a-5’ORP，再将序列反向插入pENTR1a-5’ORP载体的UBC基因内含子的3’端，将得到的重组质粒再利用LR反应，将序列1所示片段正向、UBC基因内含子和序列1所示片段反向依次串联的片段或者序列2所示片段正向、UBC基因内含子和序列2所示片段反向依次串联的片段转入植物表达载体pEarlyGate100中，得到靶向辣椒疫霉氧化固醇结合蛋白1基因并使其沉默的植物表达载体。

5.根据权利要求4所述的植物表达载体，其特征在于，所述植物表达载体的序列优选为序列表中序列3或序列表中序列4。

6.权利要求1所述的DNA片段或权利要求2-5中任意一项所述的植物表达载体在干扰辣椒疫霉氧化固醇结合蛋白1基因表达上的应用。

7.权利要求1所述的DNA片段或权利要求2-5中任意一项所述的植物表达载体在防治辣椒疫霉所引起植物病害上的应用。

8.利用权利要求2-5中任意一项所述的植物表达载体防治辣椒疫霉所引起植物病害的方法，其特征在于将含有权利要求2-5中任意一项所述的植物表达载体的溶液或试剂直接喷洒于植物的各种组织。