[发明专利]一种GSK-3β抑制剂及应用

权利要求书

1.一种GSK-3β抑制剂，其特征在于，所述GSK-3β抑制剂为CHIR99021。

2.一种如权利要求1所述的GSK-3β抑制剂在制备促进成骨和自噬的药物中的应用。

3.如权利要求2所述的GSK-3β抑制剂在制备促进成骨和自噬的药物中的应用，其特征在于，所述GSK-3β激酶抑制剂C91通过增加成骨早期标志物碱性磷酸酶生成和生化活性，增强成骨细胞标志基因的表达和骨结节形成。

4.如权利要求2所述的GSK-3β抑制剂在制备促进成骨和自噬的药物中的应用，其特征在于，所述GSK-3β激酶抑制剂C91通过增加成骨标志物碱性磷酸酶生成和生化活性，增强成骨细胞标志基因的表达和骨结节形成。

5.如权利要求4所述的GSK-3β抑制剂在制备促进成骨和自噬的药物中的应用，其特征在于，所述成骨细胞标志基因包括Alpl、Bglap、Runx2和Sp7。

6.一种实施如权利要求1所述的GSK-3β抑制剂的水凝胶，其特征在于，所述水凝胶的构建方法为：利用3D生物打印系统构建PCL、C91和细胞一体化3D模块(PCCI3D)。

7.一种鉴定如权利要求2～5任意一项所述的GSK-3β抑制剂在制备促进成骨和自噬的药物中应用的方法，其特征在于，所述鉴定GSK-3β抑制剂在制备促进成骨和自噬的药物中应用的方法包括：

(1)进行骨髓基质细胞ST2、wnt3a表达细胞和L-ctrl细胞的细胞培养后，用C91触发ST2细胞的Wnt信号通路，并进行PCL、C91和细胞一体化3D打印；

(2)分别进行细胞活力测定以及细胞增殖活性鉴定后，进行RNA提取及基因表达分析，并进行碱性磷酸酶染色；

(3)进行AP生化活性测定，并检测β-catenin核内移位；用茜素红S染色进行基质矿化试验，并进行蛋白印迹分析；

(4)进行单丹参甲胺嘧啶MDC染色后，再进行C91在3D模块(PCCI3D模块)中的药物释放实验，并进行荧光团报告基因分析以及统计分析。

8.如权利要求7所述的鉴定GSK-3β抑制剂在制备促进成骨和自噬的药物中应用的方法，其特征在于，所述步骤中(2)中，用于qRT-PCR检测的引物包括GAPDH、Alpl、Runx2、Sp7、Bglap、Lef1、Axin2和lc3b。

9.如权利要求8所述的鉴定GSK-3β抑制剂在制备促进成骨和自噬的药物中应用的方法，其特征在于，所述引物GAPDH的核苷酸序列为SEQ ID NO：1，引物Alpl的核苷酸序列为SEQ ID NO：2，引物Runx2的核苷酸序列为SEQ ID NO：3，引物Sp7的核苷酸序列为SEQ IDNO：4。

10.如权利要求8所述的鉴定GSK-3β抑制剂在制备促进成骨和自噬的药物中应用的方法，其特征在于，引物Bglap的核苷酸序列为SEQ ID NO：5，引物Lef1的核苷酸序列为SEQ IDNO：6，引物Axin2的核苷酸序列为SEQ ID NO：7，引物lc3b的核苷酸序列为SEQ ID NO：8。