[发明专利]一种高收率依诺肝素钠的制备方法

说明书

本发明公开了一种高收率依诺肝素钠的制备方法，包括如下步骤：S1、肝素季铵盐溶液的制备，S2、肝素苄基酯的制备，S3、降解，S4、脱色、氧化，S5、酸化，S6、冷冻干燥；本发明在成盐过程中，将肝素钠溶液与苄索氯铵溶液混合并进行搅拌反应，生成肝素钠苄索氯铵盐溶液，通过去除上层清液，将过量的苄索氯铵去除；直接在苄索氯铵盐湿品中加入二氯甲烷，通过萃取方式，溶解肝素苄索氯铵盐，去除水份，减少了通过多次水洗、固液分离去除过量的苄索氯铵，同时减少了长时间干燥苄索氯铵盐造成的时间浪费及对苄索氯铵盐活性的损失。进一步通过酸化，消除了因氧化产生的苯甲醛等有害杂质；本发明所述的制备方法保持了依诺肝素钠结构完整性，并且，收率高。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种高收率依诺肝素钠的制备方法。

背景技术

依诺肝素钠为一种低分子肝素钠盐，有复杂的低聚糖组成，其结构特点是大多数组分在糖链的非还原端有一个4-依诺吡喃糖醛酸的结构，15-25％的组分在还原端有1，6酐的结构。在药典中规定依诺肝素钠重均分子量范围为3800-5000，特征值为4500，分子量小于2000Da的级分比例应为12.0-20.0％，2000-8000Da的级分比例应为68.0-82.0％。

依诺肝素钠主要用于抗血栓、抗血凝、治疗急性心梗和不稳定性心绞痛等病症。依诺肝素钠的主要作用机制在于通过与抗凝血酶Ⅲ极其复合物结合，加强对Ⅹa因子和凝血酶(Ⅱa因子)的抑制作用，阻碍纤维蛋白原转变为纤维蛋白，放置血小板凝聚。依诺肝素可通过降低LDL、VLDL和升高HDL，来改变血液粘稠度、保护血管内皮细胞、预防血栓和动脉硬化、改善冠状动脉循环等作用。

目前世界上生产依诺肝素钠的方法主要为碱裂解法，有关依诺肝素钠的生产工艺也已有多篇专利文献披露。其均为季铵盐酯化制备，多篇专利所述工艺均为在水媒介中用长链季铵盐盐化肝素，通过多次固液分离，干燥后溶于二氯甲烷等有机溶剂中酯化，碱性条件下解聚，纳滤超滤得到依诺肝素钠。

然而，已有专利中制备工艺盐化操作过于繁杂，重复性固液分离，长时间干燥，酯化过程反复洗涤，对身心健康危害较大；其次，依诺肝素钠的结构与组成比较复杂，所述制备工艺中，分子量等指标均不能一次性降解合格，还需要后续的精滤等复杂的工艺步骤，不仅较难控制，而且对收率损失严重，同时，在精滤等复杂工序处理过程中，可能还会造成硫酸基的脱落，过程控制较难。

有鉴于此，有必要提供一种高收率依诺肝素钠的制备方法来解决上述技术问题。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种高收率依诺肝素钠的制备方法。解决现有的操作过于繁杂，重复性固液分离，长时间干燥，酯化过程反复洗涤，对身心健康危害较大；同时，在精滤等复杂工序处理过程中，可能还会造成硫酸基的脱落，过程控制较难等问题。

为解决现有技术中存在的上述技术问题，本发明是通过如下的技术方案来实现的：

一种高收率依诺肝素钠的制备方法，包括如下步骤：

S1、肝素季铵盐溶液的制备：将肝素钠溶液与苄索氯铵溶液混合，进行搅拌反应，得到第一反应液；

S2、肝素苄基酯的制备：将所述第一反应液静置、去上清液，加入二氯甲烷萃取，重复一次，得到沉淀物，将所述沉淀物升温，加入氯化苄，保温回流，得到第二反应液，将所述第二反应液与醋酸钠甲醇溶液混合，经抽滤、洗涤、干燥后，得到肝素苄基酯；

S3、降解：将所述肝素苄基酯溶解、升温后，加入氢氧化钠进行保温反应，反应结束迅速冷却后调节溶液的pH，加入氯化钠、甲醇进行沉淀；之后抽去上清液，加纯化水溶解沉淀物，再一次加入氯化钠、甲醇进行沉淀，得到第三反应液；

S4、脱色、氧化：去除所述第三反应液的上清液，加水溶解沉淀，升温、加入活性炭，进行保温搅拌，过滤后，调节溶液的pH，加双氧水继续进行保温搅拌反应，过滤，加入甲醇沉淀，得到第四反应液；