[发明专利]一种人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法

说明书

本申请涉及狂犬病疫苗的技术领域，具体公开了一种人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法，具体包括以下步骤：（1）在病毒灭活液中加入DNA去除液，搅拌处理，获得处理液；（2）采用柱色谱的方法对步骤（1）中的处理液进行纯化，获得病毒纯化液；（3）对步骤（2）中的病毒纯化液进行冻干，获得人用狂犬病疫苗；其中，所述DNA去除液包括溶质和溶剂；所述溶质包括乳酸薄荷酯以及茶氨酸和甘露醇中的一种或两种。本申请提供的方法能够有效去除人用狂犬病疫苗中的残留DNA，同时保证病毒的回收率较高。

技术领域

本申请涉及狂犬病疫苗的技术领域，具体涉及一种人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法。

背景技术

冻干人用狂犬病疫苗以其在生产工艺、经济效益和质量等方面的综合优势，占据了我国的大部分狂犬病疫苗市场。目前，人用狂犬病疫苗的生产需要经过Vero细胞培养、病毒增殖、病毒收获和浓缩、病毒灭活以及纯化等过程。然而，在细胞培养和病毒增殖的过程中，会产生游离的宿主DNA及与病毒蛋白结合的宿主DNA。这些残留DNA会随疫苗一起被注入到人体内，使得人体由于异源物质的注入引起不良反应。

相关技术中最广泛的DNA去除方式有离子交换层析、硫酸鱼精蛋白沉淀、酶解三类方法。其中，离子交换层析方法利用DNA带有大量的负电荷，可以被阴离子交换剂吸附，从而实现对残留DNA的去除。但是利用上述方法去除人用狂犬病疫苗中的残留DNA时，疫苗中的病毒和残留DNA会一起被吸附在介质上，然后通过控制洗脱条件实现病毒和残留DNA的先后洗脱，故残留DNA的去除率较低。

采用硫酸鱼精蛋白去除DNA时，带有大量正电荷的硫酸鱼精蛋白可以与带有大量负电荷的DNA结合，产生的结合物容易形成沉淀，通过离心便能实现对DNA的去除。然而，上述方法在去除残留DNA的同时，硫酸鱼精蛋白还会结合病毒，使得病毒损失严重，从而导致疫苗药效降低。

当使用DNA限制性内切酶去除DNA时，酶切后的DNA变成了小片段，然后利用凝胶过滤色谱将DNA和病毒分离开。但是，一方面，该方法只能将大部分残留DNA和病毒分离开，残留DNA的去除效率较低。另一方面，DNA限制性内切酶的活性作用容易受pH、温度等外界环境条件限制，故残留DNA的去除成本较高。

因此，残留DNA的去除成为人用狂犬病疫苗生产纯化的难题。

发明内容

为了有效降低人用狂犬病疫苗中DNA的残留量，同时保证病毒的回收率较高，本申请提供一种人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法。

本申请提供的一种人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法，采用如下的技术方案：

一种人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法，具体包括以下步骤：

(1)在病毒灭活液中加入DNA去除液，搅拌处理，获得处理液；

(2)采用柱色谱的方法对步骤(1)所述处理液进行纯化，获得病毒纯化液；

(3)对步骤(2)所述病毒纯化液进行冻干，获得所述人用狂犬病疫苗。

其中，所述DNA去除液包括溶质和溶剂；所述溶质包括乳酸薄荷酯以及茶氨酸和甘露醇中的一种或两种。

本申请提供的人用狂犬病疫苗中残留DNA的去除方法中，以病毒灭活液作为人用狂犬病疫苗的来源，采用乳酸薄荷酯以及茶氨酸和甘露醇中的一种或两种作为DNA去除液中的溶质，对病毒灭活液进行搅拌处理，之后采用柱色谱的方法对处理液进行纯化获得病毒纯化液，并将病毒纯化液冻干制备成人用狂犬病疫苗。本申请提供的方法，能够有效去除人用狂犬病疫苗中残留的DNA，同时使得病毒的回收率较高。