[发明专利]一种以工程化红细胞作为滋养层细胞体外高效扩增NK细胞的方法

权利要求书

1.一种以工程化红细胞作为滋养层细胞体外高效扩增NK细胞的方法，其特征在于：使用红细胞表面修饰IL-15,4-1BB，CD335单抗以及 CD2单抗等蛋白形成工程化红细胞滋养层细胞，工程化红细胞滋养层细胞可以用于反复刺激PBMC在体外获得大量高纯度NK细胞。

2.根据权利要求1所述的一种用于体外高效扩增NK细胞的工程化红细胞滋养层细胞，其特征在于：工程化红细胞表面修饰的蛋白组合有IL-15,4-1BB，CD335单抗以及 CD2单抗。

3.根据权利要求1所述的一种用于体外高效扩增NK细胞的工程化红细胞滋养层细胞，其特征在于：工程化红细胞使用低浓度戊二醛醛化，表面修饰的蛋白组合有IL-15,4-1BB，CD335单抗以及 CD2单抗,其通过以下方法制得：

步骤一：新鲜红细胞使用0.025%戊二醛室温震荡作用45min；

步骤二：用PBS溶液300g 8min离心洗涤后分别用10μg/ml CD335单抗，10μg/ml IL-15、5μg/ml CD2单抗以及10μg/ml 4-1BB反应2小时；

步骤三：使用PBS溶液 300g 8min洗涤后获得工程化红细胞，工程化红细胞滋养层细胞保存于2-8°环境。

4.根据权利要求1所述的一种用于体外高效扩增NK细胞的工程化红细胞滋养层细胞，可以用于反复刺激PBMC在体外获得大量高纯度NK细胞其具体使用方法如下：

步骤一：从脐血和外周血中获得单个核细胞，按工程化红细胞滋养层细胞/MNC 2：1的比例铺瓶培养；

步骤二：隔天补加新鲜培养液，培养第7天按工程化红细胞滋养层细胞/MNC 2：1的比例再次刺激所培养目的细胞；

步骤三：隔天补液，培养第14-15天收获目的细胞。