[发明专利]一种巯基化合物的分析方法

说明书

本发明提供了一种巯基化合物的分析方法，包括：1)将各个巯基化合物的标准物质分别溶于pH＝10‑12的水溶液中，与2,4,6‑三氟苄胺与邻苯二甲醛衍生化后，分别得到各个衍生化后的巯基化合物的标准物质的¹⁹FNMR信号谱图；2)将待测巯基化合物溶于pH＝10‑12的水溶液中，经2,4,6‑三氟苄胺和邻苯二甲醛衍生化后，得到各个衍生化后的待测巯基化合物的核磁共振¹⁹FNMR信号谱图；3)将两个谱图叠加比较，从而鉴别出待测巯基化合物；同时，可以通过衍生化后的产物的¹⁹FNMR的邻位或对位峰面积与浓度的关系式进行定量并相互验证；本发明的方法简单易行、可即时制样即时测样，具有较高的灵敏度与选择性，能有效避免来自其他生物分子的干扰，可用于生物体系中巯基化合物的定性定量分析。

技术领域

本发明属于化学分析技术领域，尤其是涉及一种巯基化合物的分析方法。

背景技术

巯基是细胞中活性最高的基团，常见的巯基化合物如图1所示，其中，半胱氨酸(cysteine，Cys)、高半胱氨酸(homocysteine，Hcys)和N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine，NAC)，是人体内丰富的生物小分子巯基化合物，这些生物分子具有强还原性和亲核性，参与生物体多种生理过程，维持机体正常生理功能，如蛋白质的合成，细胞的氧化还原稳态等。目前已报道生物体中巯基化合物的代谢异常还与多种疾病相关，如糖尿病、白血病、急性肝衰竭、神经系统疾病等。基于这些发现，越来越多的研究开始关注于寻找疾病的生物标志物，例如，Hcys己经被认为与心血管疾病相关，并且尿液中过量的Cys也可用来诊断胱氨酸尿病；此外，某些巯基化合物，如NAC，还可用于治疗高血压和肝病等，因此，高灵敏度和高选择性的检测巯基化合物的方法对于生化研究和疾病诊断方面具有重要的意义。

目前，生物巯基化合物的传统分析方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、质谱法(MS)、液相色谱－质谱法(HPLC-MS)、毛细管电泳法和荧光法等，但以上方法大多需要复杂的样品预处理，检测时间较长，背景信号干扰大，对生物巯基化合物的选择性较低。其中，荧光法已被广泛用于生物样品分析，如在谷胱甘肽(GSH)存在条件下特异性检测人体活纤维肉瘤细胞中的Cys/Hcy，但其分辨率低依然是限制其检测应用的最为关键的问题。相较于荧光法检测来讲，核磁共振(NMR)是一项重要的分析技术，在分析混合物的同时可以提供大量的物质结构信息，包括未知化合物的构成、构型和构象等，且背景干扰小。由于¹H的天然丰度有99.985％，具有较高的检测灵敏度，它常常应用于代谢组学分析中；然而，氢谱的谱宽较窄，对于结构较为复杂的样品，其谱图中容易出现谱峰重叠的现象，给巯基化合物的检测带来一定的困难。因此，具有高灵敏度的核磁共振目前用于巯基化合物的分析领域中的报道较少。

综上所述，亟需发展一种快速简便，灵敏度高、选择性好，无背景干扰，可同时检测多种小分子巯基化合物的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种简单易行、可即时制样即时测样，对巯基化合物的检测具有较高的灵敏度与选择性，能有效避免来自其他生物分子的干扰，可同时检测多种小分子巯基化合物，适用于对生物体系中巯基化合物进行定性定量分析。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：

一种巯基化合物的分析方法，包括以下步骤：

1)将各个巯基化合物的标准物质分别溶于pH＝10-12的水溶液中，与2,4,6-三氟苄胺充分混匀后，加入邻苯二甲醛和氘代试剂，进行核磁共振测试，分别得到各个衍生化后的所述的巯基化合物的标准物质的核磁共振¹⁹F NMR信号谱图；

2)将待测巯基化合物溶于pH＝10-12的水溶液中，与所述的2,4,6-三氟苄胺充分混匀后，加入所述的邻苯二甲醛和所述的氘代试剂，进行核磁共振测试，得到衍生化后的所述的待测巯基化合物的核磁共振¹⁹F NMR信号谱图；