[发明专利]颅缝早闭症小鼠模型、其构建方法及应用

权利要求书

1.一种颅缝早闭症小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括： S1、提供 Rosa26^FGFR2 小鼠和 Sp7-CRE 小鼠；

S2、将 Rosa26^FGFR2 小鼠进行自交，得到 Rosa26^FGFR2 阳性表达的F1 代小鼠； 将Sp7-CRE 小鼠进行自交，得到 Sp7-CRE 阳性表达的 F1 代小鼠；

S3、将Rosa26^FGFR2-F1 代小鼠和 Sp7-CRE-F1 代小鼠进行杂交，得到F2 代小鼠，表现为Rosa26^FGFR2:Sp7-CRE 双阳性的即为所述颅缝早闭症小鼠模型；

其中，所述Rosa26^FGFR2 小鼠和 Sp7-CRE 小鼠的基因型分别为 Rosa26^FGFR2/+

和Sp7-CRE^+/-，提供所述 Rosa26^FGFR2 小鼠和所述Sp7-CRE 小鼠的步骤包括： 用CRISPR/Cas9 技术构建Rosa26 基因中 LoxP-FGFR2 条件性过表达小鼠，

获得Rosa26^FGFR2/+小鼠；

用CRISPR/Cas9 技术构建Sp7 基因启动子区域携带CRE 元件的Sp7-CRE^+/-

杂合小鼠。

2.如权利要求 1 所述的构建方法，其特征在于，在所述用 CRISPR/Cas9 技术构建Rosa26 基因中LoxP-FGFR2 过表达小鼠，获得 Rosa26^FGFR2 小鼠中，所采用的检测引物WT-F、WT-R、FGFR2-F 和FGFR2-R 的序列分别如SEQ ID NO.1 至SEQ ID NO.4 所示。

3.如权利要求 2 所述的构建方法，其特征在于，在所述用 CRISPR/Cas9 技术构建Sp7基因启动子区域携带 CRE 元件的Sp7-CRE^+/-杂合小鼠中，所采用的检测引物Transgene-F、Transgene-R、Control-F 和Control-R 的序列分别如SEQ ID NO.5 至SEQ ID NO.8 所示。

4.如权利要求 3 所述的构建方法，其特征在于，步骤 S3 中，还包括利用PCR 方法对所述 Rosa26^FGFR2 和Sp7-CRE 双阳性小鼠进行鉴定筛选，当 PCR 验证出的目的条带同时包括 SEQ ID NO.3 至SEQ ID NO.6 中两条条带时，认为得到Rosa26^FGFR2:Sp7-CRE 双阳性小鼠。

5.如权利要求 1 所述的构建方法，其特征在于，所述Rosa26^FGFR2-F1 代小鼠的基因型包括 Rosa26^FGFR2/+和Rosa26^FGFR2/FGFR2；和/或，所述Sp7-CRE-F1 代小鼠的基因型包括Sp7-CRE^+/-和Sp7-CRE^-/-。

6.如权利要求 5 所述的构建方法，其特征在于，所述颅缝早闭症小鼠模型的基因型包括Rosa26^{FGFR2/+:Sp7-CRE+/-}、Rosa26 ^FGFR2/FGFR2:Sp7-CRE^+/-、Rosa26^{FGFR2/+:Sp7-CRE-/-}和Rosa26 ^FGFR2/FGFR2:Sp7-CRE^-/-。

7.一种权利要求 1 至 6 中任一项所述的构建方法所述的小鼠模型或其子代在不以疾病的诊断和治疗为目的的颅缝早闭综合症相关领域的应用，其特征在于，所述应用包括在制备或筛选预防、诊断或者治疗颅缝早闭综合症药物的用途。