[发明专利]一种黑曲霉群菌株中伏马菌素合成基因的检测方法

说明书

本发明提供了一种黑曲霉群菌株中伏马菌素合成基因的检测方法。所述检测方法包括：采用第一正向引物和第一反向引物进行检测，所述第一正向引物的序列如序列表中SEQ ID NO:1所示，所述第一反向引物的序列如序列表中SEQ ID NO:2所示，所述第二正向引物的序列如序列表中SEQ ID NO:3所示，所述第二反向引物的序列如序列表中SEQ ID NO:4所示。该检测方法利用PCR技术，能够在黑曲霉群菌株尚未产生FB以及产FB水平极低时进行检测，可实现对黑曲霉群菌株产FB污染风险的早期预警。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体地，涉及黑曲霉群菌株中伏马菌素合成基因的检测方法。

背景技术

伏马菌素（B type Fumonisin，FB）是一类由不同的多氢醇和丙三羧酸组成的结构类似的双酯类化合物，FB有FA₁、FA₂、FB₁、FB₂、FB₃、FB₄、FC₁、FC₂、FC₃、FC₄和FP₁共11种。FB具有肝肾毒性，可引起马脑软化症，并被国际癌症研究机构（International Agency forResearch on Cancer，IARC）列为2B类致癌物。黑曲霉群菌株是食品发酵工业常用菌种，但黑曲霉发酵液中首次检测到FB以后，黑曲霉群菌株的安全性问题再次引发广泛关注。

目前判断菌株是否产FB的重要方法是通过测定黑曲霉群菌株发酵后是否可以产生FB。常采用的技术主要有色谱技术和色谱质谱联用技术等。色谱技术和色谱质谱联用技术虽然可以对食品或饲料中FB的污染情况进行定性或定量分析，但采用这两种方法检测时，需要样本中已经产生FB或已经被FB污染到一定程度才能进行测定，但在黑曲霉菌株尚未产生FB或产FB水平极低时是无法检测到的，更是无法实现对黑曲霉菌株产FB污染风险进行预测并实现早期预警的。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种黑曲霉群菌株中伏马菌素合成基因的检测方法。

本发明实施例提供了一种黑曲霉群菌株中伏马菌素合成基因的检测方法，所述检测方法包括：

采用第一正向引物和第一反向引物进行检测，所述第一正向引物的序列如序列表中SEQ ID NO:1所示，所述第一反向引物的序列如序列表中SEQ ID NO:2所示。

具体地，所述检测方法还包括：第二正向引物和第二反向引物，所述第二正向引物的序列如序列表中SEQ ID NO:3所示，所述第二反向引物的序列如序列表中SEQ ID NO:4所示。

具体地，所述检测方法包括：

提取待测样品的总DNA，并对所述总DNA进行纯化；

确定纯化后的所述总DNA的纯度后，利用所述第一正向引物、所述第一反向引物、所述第二正向引物和所述第二反向引物，采用聚合酶链式反应进行扩增，得到扩增产物；

将所述扩增产物和核酸分子量参照物进行琼脂糖凝胶电泳，得到扩增片段；

若所述扩增片段在749bp处，则所述待测样品中有所述黑曲霉群菌株中伏马菌素合成基因。

具体地，所述扩增的体系包括：所述总DNA 1～2μL、所述第一正向引物1.0μL、所述第一反向引物1.0μL、所述第二正向引物1.0μL、所述第二反向引物1.0μL、2×高保真DNA聚合酶混合物12.5μL和ddH₂O 8.5～9.5μL。

具体地，所述扩增的程序包括：95℃预变性2min，30个循环，72℃延伸5min，每个所述循环均包括：95℃变性20s、58℃退火20s和72℃延伸60s。