[发明专利]一种黑曲霉群菌株中伏马菌素合成基因的检测方法有效
| 申请号： | 202210541517.6 | 申请日： | 2022-05-19 |
| 公开（公告）号： | CN114686617B | 公开（公告）日： | 2022-08-26 |
| 发明（设计）人： | 韩小敏;徐文静;江涛;李凤琴;徐进 | 申请（专利权）人： | 国家食品安全风险评估中心 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/685 |
| 代理公司： | 北京秉文同创知识产权代理事务所(普通合伙) 11859 | 代理人： | 张文武;陈少丽 |
| 地址： | 100021 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 曲霉 菌株 中伏 菌素 合成 基因 检测 方法 | ||
1.一种黑曲霉群菌株中伏马菌素合成基因的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：
采用第一正向引物和第一反向引物进行检测，获得扩增产物，所述第一正向引物的序列如序列表中SEQ ID NO:1所示，所述第一反向引物的序列如序列表中SEQ ID NO:2所示，若所述扩增产物长749bp，则待测样品中有所述黑曲霉群菌株中伏马菌素合成基因。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：
提取待测样品的总DNA，并对所述总DNA进行纯化；
确定纯化后的所述总DNA的纯度后，利用所述第一正向引物和所述第一反向引物，采用聚合酶链式反应进行扩增，得到扩增产物；
将所述扩增产物和核酸分子量参照物进行琼脂糖凝胶电泳；
若所述扩增产物在749bp处，则所述待测样品中有所述黑曲霉群菌株中伏马菌素合成基因。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述扩增的体系包括：所述总DNA1～2μL、所述第一正向引物1.0μL、所述第一反向引物1.0μL、2×高保真DNA聚合酶混合物12.5μL和ddH2O 8.5～9.5μL。
4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述扩增的程序包括：95℃预变性2min，30个循环，72℃延伸5min，每个所述循环均包括：95℃变性20s、58℃退火20s和72℃延伸60s。
5.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，将所述待测样品经过培养后提取所述总DNA。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述培养的 方法包括：将所述待测样品接种于培养基上，于28℃±1℃的恒温培养箱中静置培养5～7天，得到培养物；
挑取所述培养物接种于液体培养基中，于28℃±1℃震荡培养24～120h。
7.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括：采用分光光度计确定纯化后的所述总DNA的纯度。
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