[发明专利]一种基于矿物元素和微卫星DNA的西藏牦牛溯源方法

权利要求书

1.一种基于矿物元素和微卫星DNA的西藏牦牛溯源方法，其特征在于，选自如下标志物中的至少一种：Mg元素、Cu元素、Se元素、Cd元素、Y元素、La元素、Ce元素、Pr元素、Nd元素、Sm元素、Gd元素、Dy元素、Er元素、TGLA53等位基因片段、TGLA227等位基因片段、HEL13等位基因片段、INRA005等位基因片段、TGLA57等位基因片段、ILSTS013等位基因片段、TGLA73等位基因片段和AGLA293等位基因片段。

2.一种基于矿物元素和微卫星DNA的西藏牦牛溯源方法，其特征在于，包括：

(1)牦牛肉预处理

采集西藏自治区三种牦牛，并对其进行预处理，制备牦牛分析样品。

(2)矿物元素和微卫星DNA分析

应用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定牦牛分析样品中Mg、Cu、Se、Cd、Y、La、Ce、Pr、Nd、Sm、Gd、Dy、Er矿物元素含量；

应用聚合酶链反应法(PCR)获得牦牛肉样品中基因型数据(TGLA53、TGLA227、HEL13、INRA005、TGLA57、ILSTS013、TGLA73和AGLA293等位基因片段)。

(3)化学计量学分析

对矿物元素数据和基因型数据(等位基因片段的长度均值)进行正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)、层次聚类分析(HCA)和线性判别分析(LDA)。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述牦牛肉样品的具体信息为西藏自治区亚东县帕里地区的帕里牦牛、西藏自治区昌都地区类乌齐县的类乌齐牦牛和西藏自治区林芝地区工布江达县的工布江达牦牛。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述矿物元素预处理为：将牦牛肉样品进行烘干-粉碎-脱脂-磨粉-消解处理。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述烘干具体为：取被切碎的牦牛肉样品15g左右平摊于平皿中，然后放在鼓风干燥箱中(70℃)干燥48h。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述脱脂具体为：采用浸提法对牦牛肉脱脂，浸提的溶剂为氯仿-甲醇(v:v，2:1)溶液，料液比为1:5。涡旋振荡10min。随后，在12℃5000rpm/min的条件下离心5min。重复浸提两次后，将脱脂后的样品置于干燥器中干燥。

7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述消解具体为：称取0.2～0.4g样品，加入7mL硝酸，1mL双氧水，采用微波消解法消解。微波消解程序为从室温升至120℃(20min)，保持20min，从120℃升至200℃(15min)，保持30min。消解功率为1400w。消解完成后赶酸定容至25mL。