[发明专利]一种cTnI干式均相化学发光检测试剂盒

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种cTnI干式均相化学发光检测试剂盒。本发明提供的试剂盒中包括生物素标记的抗cTnI 24‑40aa嵌合人源抗体冻干小球、抗cTnI 41‑49aa抗体和抗TnC抗体包被的受体微球冻干小球、链霉亲和素包被的供体微球冻干小球、进样稀释液及检测卡。本发明提供的试剂盒采用cTnI+cTnI‑TnC形式检测cTnI抗原，选取能够优先识别较稳定的氨基酸序列的抗体对，从而解决漏检问题；还可以解决混标带来的不确定影响，提高了检测灵敏度，并且使标记过程以及检测结果稳定、可靠，具有更高的发光值及更优的灵敏度。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种cTnI干式均相化学发光检测试剂盒。

背景技术

心肌肌钙蛋白I（cTnI）在心肌组织中表达，在胎儿、健康人或疾病状态下的成人骨骼肌中不表达，因而对心肌具有高度特异性。于1994-1995年被美国国家食品与药品管理局（FDA）批准应用于临床急性心肌梗死（AMI）的诊断。肌钙蛋白（Tn）属于调节蛋白，由三个亚单位组成，即肌钙蛋白C（TnC）、肌钙蛋白I（TnI）及肌钙蛋白T（TnT）。TnI是一种碱性蛋白，由209个氨基酸组成，是一个延伸分子，采取反向平行与TnC 形成二元复合物。TnC 是钙离子受体，参予调节细丝的活化过程。TnT 是一种非对称性蛋白质，伴有一球形C端功能区，它有一个与原肌球蛋白结合的位点。cTnI以不同形式存在于心肌细胞中，如以游离形式存在于胞浆内cTnI 只占很少部分，大部分与肌钙蛋白T及C亚单位结合以复合体形式存在。当心肌损伤时，外周血中cTnI主要以cTnI -TnC复合物形式居多(90％以上)。cTnI -cTnT复合物仅发现存在于50％以下病人的血中，因此，检测的重要性远不如cTnI-cTnC复合物；其他形+式的cTnI（如氧化型、还原型、磷酸化、去磷酸化、蛋白降解形式）较少。当心肌细胞膜的完整性受破坏，cTnI先从胞浆内释放，因此，血清水平很快升高，而结合的cTnI由于相对分子质量大，从心肌细胞结构蛋白缓慢持续的释放。心肌损伤后，外周血中心肌肌钙蛋白I一般在5～8h出现增高，在12～24h达最高值，且高水平往往维持7～10d。此外，研究者发现位于氨基酸残基33～110之间的片段高度稳定，能产生较长的持续信号，并分析可能是由于其与cTnC形成了复合物所致。cTnI的蛋白水解片段中，具有96～116个氨基酸残基的片段有较强的抵抗蛋白水解作用，在血清中与TnC形成二聚物的TnI片段是稳定的，而且可能拥有整个抑制区域。cTnI的抑制区域对cTnI-cTnC复合物的免疫活性和稳定性有重要作用。

cTnI的测定始于20世纪80年代中期，多采用双抗体竞争放射免疫法和竞争性ELISA 测定法。目前对cTnI的检测多采用化学发光法。用化学发光物质标记抗cTnI 抗体大大提高了对cTnI测定的精确性和敏感性，但化学发光在非均相标记免疫分析技术中，通过“分离洗涤”去除未参与结合的游离标记物，这降低了检测的可重复性；均相标记免疫分析技术的特点是全程无分离洗涤过程，不存在洗涤误差，但常规的光激均相发光试剂均以液相产品为主，试剂在液态下的运输和储存稳定性受到很大限制。且现通用的cTnI测定方法尚无标准化，不同的方法采用不同的抗体识别位点，大多数文献资料均采用识别cTnI抗原表位（包含易水解磷酸化片段）的抗体而非抗cTnI-TnC复合物的抗体进行对cTnI的测定，可能会造成漏检或者是灵敏度、特异性不足等问题。

中国专利申请CN104090105A公开了一种检测HEV抗体的方法及试剂盒和该试剂盒的制备方法，其提供的试剂盒同样可以降低漏检情况的发生，但其是通过增加抗原检测位点实现的；进一步地，中国专利申请CN107918022A公开了一种cTnI检测试剂盒及其使用方法，提供的试剂盒中包含校准品、清洗液、底物溶液、预处理液、特异性抗体、酶结合物工作液和磁珠结合物工作液等组分，但是其提供的试剂盒检测灵敏度较低，容易出现漏检的问题。

综上可知，现有技术中普遍存在容易造成漏检、灵敏度低及特异性不足等问题。

发明内容