[发明专利]一种cTnI干式均相化学发光检测试剂盒

权利要求书

1.一种cTnI干式均相化学发光检测试剂盒，其特征在于，包括如下组分：生物素标记的抗cTnI 24-40 aa嵌合人源抗体冻干小球、抗cTnI 41-49 aa抗体包被的受体微球和抗TnC抗体包被的受体微球制成的冻干小球、链霉亲和素包被的供体微球冻干小球、进样稀释液及检测卡；抗TnC抗体的标记pH为7.4~8.0，采用两步法标记，制备过程如下：

（1）将100μL，浓度为10mg/mL受体微球混悬液放入试管内，于14000rpm的转速下离心15min，去除上清液，加入两倍体积的pH5~6的MES溶液清洗两遍，同样于14000rpm的转速下离心15min，去除上清，加入200μL的pH5~6的MES溶液，超声分散，制成初级微球混悬液I；

（2）向步骤（1）制得的初级微球混悬液I中分别依次加入2~4μL 10mg/mL的EDC-MES溶液、4~8μL 10mg/mL的NHS-MES，混匀，在30~37 ℃摇床下震荡0.5h，反应结束后离心去除上清，加入200μL pH7.4~8.0 0.05M的HEPES清洗2遍，同样于14000rpm的转速下离心15min，去除上清，加入200μL的pH7.4~8 HEPES溶液，超声分散，制成次级微球混悬液Ⅱ；

（3）向步骤（2）制成次级微球混悬液Ⅱ中分别依次加入50~70μg抗TnC抗体、1~3μL 10%的Tween20-去离子水溶液，混匀，在30~37 ℃摇床下震荡4 h，反应结束后加入1mg牛血清白蛋白和1.2μL乙醇胺，混匀，置于30~37℃摇床上封闭30min，于14000rpm转速下离心15min，去除上清液，加入两倍体积的缓冲液①清洗两遍，加入50μL的缓冲液①贮存；所述链霉亲和素包被的供体微球制备过程如下：

A.将100μL，浓度为10mg/mL供体微球混悬液放入试管内，于14000rpm的转速下离心15min，去除上清液，加入两倍体积的pH5~6 MES溶液清洗两遍，同样于14000rpm的转速下离心15min，去除上清，加入200μL的pH5~6 MES溶液，超声分散，制成初级微球混悬液I；

B.向步骤A制得的初级微球混悬液I中分别依次加入50~100μg链霉亲和素、2~4μL10mg/mL的EDC-MES溶液，混匀，在30~37 ℃摇床下震荡2 h，反应结束后1mg牛血清白蛋白和1.2μL乙醇胺，混匀，置于30~37℃摇床上封闭30min，于14000rpm转速下离心15min，去除上清液，加入两倍体积的缓冲液①清洗两遍，加入50μL的缓冲液①贮存；

所述抗cTnI 41-49 aa抗体包被的受体微球和抗TnC抗体包被的受体微球工作液分别用缓冲液②分别稀释至工作浓度为0.5mg/mL和0.25mg/mL；所述生物素标记的抗cTnI 24-40 aa嵌合人源抗体工作液用缓冲液③稀释至工作浓度为2.5μg/mL；所述链霉亲和素包被的供体微球工作液用缓冲液①稀释至工作浓度为0.25mg/mL；所述缓冲液①由0.25M TRIS、0~0.9%氯化钠、5~7.5%牛血清白蛋白、0.5~1.0%Tween20、0.5% Proclin-300和去离子水配制而成，pH值8.5；所述缓冲液②由0.25M TRIS、0~0.9%氯化钠、5~7.5%牛血清白蛋白、0.5~1.0%Tween20、0.5% Proclin-300、0.01~0.05%苯酚红钠盐和去离子水配制而成；所述缓冲液③由0.25M TRIS、0~0.9%氯化钠、5~7.5%牛血清白蛋白、0.5~1.0%Tween20、0.5%Proclin-300、0.01~0.05%日落黄和去离子水配制而成，pH8.5；所述抗41-49 aa抗体的标记pH值为5~6，采用一步法标记，具体制备过程如下：

a.将100μL，浓度为10mg/mL受体微球混悬液放入试管内，于14000rpm的转速下离心15min，去除上清液，加入两倍体积的pH5~6 MES溶液清洗两遍，同样于14000rpm的转速下离心15min，去除上清，加入200μL的pH5~6 MES溶液，超声分散，制成初级微球混悬液I；

b.向步骤a制得的初级微球混悬液I中分别依次加入50~70μg抗cTnI 41-49 aa抗体、2~4μL 10mg/mL的EDC-MES溶液、1~3μL 10%的Tween20-去离子水，混匀，在30~37 ℃摇床下震荡2h，反应结束后加入1mg牛血清白蛋白和1.2μL乙醇胺，混匀，置于30~37℃摇床上封闭30min，于14000rpm转速下离心15min，去除上清液，加入两倍体积的缓冲液①清洗两遍，加入50μL的缓冲液①贮存。